菊粉酶产酶菌株筛选与鉴定.pdfVIP

第 24卷第 3期 徐 州 工 程 学 院 学 报 (自然 科 学 版 ) 2009年 9月 Vo1．24No．3 JournalofXuzhou InstituteofTechnology (NaturalSciencesEdition) SEP．2009 菊粉酶产酶菌株筛选与鉴定 曹泽虹 ，董玉玮 ，苗敬芝，吕兆启 (徐州工程 学院，江苏 徐州 221008) 摘 要：从徐州沛县河 口镇秦庄村牛蒡种植基地取得的土壤样本 中，筛选 出产菊粉酶的菌株， 对从土壤 中分离到的4O株产菊粉酶的各类菌株进行酶活的测定．通过透 明圈法初筛及摇瓶复筛， 获得产菊粉酶能力较高的霉菌 3株，为C122803、D081506和D081513．这三株菌株的酶活分别达 到1．4l1u／mL、1．895u／mL、1．792u／mL，且其 I／S值各达到 1．1821、1．6806、1．3483．其 中 D081506的I／S值最大．对这三株菌株进行初步的微生物分类鉴定 ，符合黑 曲霉 的形态特征 ，初步 鉴定为黑 曲霉． 关键词 ：菊粉酶；黑曲霉；筛选；菌种鉴定 中图分类号：Q939．97 文献标志码 ：A 文章编号 ：1674～358X(2009)03—0006—03 菊粉又名菊糖，广泛存在于自然界菊科植物体内，例如菊芋(又名洋姜)、菊苣、大丽花等．它是一种 由呋 喃构型的 )【_果糖经 (2—1)糖苷键脱水聚合而成的果聚糖混合物，其终端以a(1—2)糖苷键连接一分子葡 萄糖，聚合度一般在 2～60．菊粉酶是一种催化水解菊糖中#-2，1-果糖苷键的水解酶．它们分为外切型菊粉 酶和内切型菊粉酶．它们分别可以水解菊糖得到高果糖浆或低聚果糖I1]． 低聚果糖系一种聚合度为 2--7个单糖的功能性低聚糖 ，是 良好的双歧 因子和水溶性膳食纤维 ，具有多 种重要的生理功能．近年来 ，低聚果糖作为一类功能性食品甜味剂引起 了人们的广泛注意，它具有不易被人 体消化吸收、低热值、不易被腐败菌发酵、防腐和抗龋齿等特性 ，还能够促进人体肠道中有益的双歧杆菌增 殖，抑制肠道有害腐败菌的生长，从而改善肠道微生态环境 ，起到调整人体生理功能、增强机体免疫力、预 防疾病等作用_2． 目前 ，工业上多从菊芋根中提取菊糖 ，应用 内切型菊粉酶水解菊糖生产低聚果糖．菊芋菊糖是一种聚合 度在 25～35的果糖复合物 ，其提取工艺繁琐 ，要获取低聚合度的菊糖 比较困难 ]． 据报道 ，牛蒡根中菊糖 的质量分数可高达 9O 以上．牛蒡 (ArctiumLappaL．)是菊科牛蒡属直根系二 年生大型草本植物 ，在我国已实现大面积的人工栽培_3]．目前 ，作为一种新 、特蔬菜，已出 口日本 以及欧洲 等国．但国际市场对出口牛蒡规格要求较高，造成等外根被当作废物大量抛弃，致使资源浪费 ]． 取种植牛蒡附近的土壤 ，以牛蒡汁中的菊糖作为唯一碳源 ，筛选能够分泌菊粉酶降解菊糖 的微生物 ， 以期能够获得水解牛蒡菊糖的内切型菊粉酶．利用菊糖含量较高的牛蒡生产低聚果糖，可为牛蒡的开发利 用和低聚果糖的工业化生产开辟新思路． 1 材料与方法 1．1 牛蒡 购 白徐州市翟山农 贸市场． 1．2 菌株 采 自腐烂牛蒡根附近的土壤． 收稿 日期 ：2009—02—16 基金项 目：江苏省 高校 自然科 学研究计划资助项 目(07KJD550202) 作者简介 ：曹泽虹 (1963)，女 ，河南焦作人 ，副教授 ，主要从事食品生物技术研 究 · 6 · 曹泽虹 ，等 ：菊粉酶产酶菌株筛选与鉴定 1．3 菌种的筛选 初筛培养基 ：牛蒡汁 3mI(1g／mL)，蛋 白胨 1g，酵母膏 1g，琼脂 2g，定容至 100mL． 诱导培养基 ：牛蒡汁 10mL(1g／mL)，酵母膏 1g，磷酸氢二钾 1．5g，定容至 100mL． 发酵培养基 ：牛蒡汁 7mL(1g／mL)，酵母膏 1．6g，磷酸氢二钾 0．5g，硫酸铵 0．5g，氯化钠0．5g，琼脂 2g，定容至 500mL． 以上培养基配制好后 ，在 121℃温度条件下高压灭菌 30min． 1．4 菊粉酶活力的测