一株产生广谱抗菌物质地衣芽孢杆菌的筛选与鉴定.pdfVIP

第 27卷第 2期 徐 州 工 程 学 院 学 报 (自然 科 学 版 ) 2012年 6月 Vo1．27No．2 JournalofXuzhou InstituteofTechnology (NaturalSciencesEdition) Jun．2012 一 株产生广谱抗菌物质地衣芽孢杆菌的筛选与鉴定 高兆建，樊 陈，陈尚龙，巫友华 (徐州工程学院，江苏 徐州 221008) 摘要 ：采用异步培养法，从土壤样品中筛选到一株产抗菌物质活性较强的菌株 F69．结合菌落 形态、生理生化指标和 16SrDNA序列分析对菌株 F69进行菌种鉴定．菌株 F69在系统发育上属 于芽孢杆菌属，它和地衣芽胞杆菌菌株 的16SrDNA序列相似性最高为 99 ，该菌株被鉴定为地 衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)．菌株F69可作为抗菌物质产生菌进行进一步深入研究． 关键词 ：抗菌物质 ；地衣芽孢杆菌；筛选；鉴定 中图分类号 ：Q93—331 文献标识码 ：A 文章编号：1674—358X(2012)02—0040—05 食品营养成分丰富，非常适合微生物的生长繁殖，在适宜的条件之下，食品中大量微生物繁殖 ，导致食品 腐败变质．为了防止食品腐败，延缓货架期 ，食 品中常用化学防腐剂 (山梨酸钾 、苯甲酸钠、对羟基苯甲酸酯类 等)能抑制腐败微生物生长．这些传统的防腐剂可以有效抑制或杀灭微生物，防止食品的腐败变质．随着科学 的发展，人们逐渐认识到这些化学防腐剂对人体有一定的毒害作用 ，对生态环境也会造成污染．因此 ，化学防 腐剂在食品中的用量 国家有严格 的限制．故研究开发安全、高效、无毒的食 品防腐剂成为新 的发展方向．天然 食品防腐剂作为一类新型安全高效的防腐剂，已成为食品科学研究的热点口]．目前抗菌物质在国内外的研究 主要集中于医药、农业、畜牧业等方面，而在食品防腐方面的研究甚少 ；而且抗菌物质多从植物 、昆虫等材料 中提取 ，因提取原料受限和提取工艺复杂 、成本较高 ，难以形成产业化．通过微生物发酵 ，获取高活性的抗菌 物质是具有重要前景 的生产技术．目前，纳他霉素 (natamycin)、表面活性素 (surfactin)、制磷脂菌素 (plipstatin)、芬荠素 (fengycin)、乳酸链球菌素 (nisin)、伊枯草菌素 (iturin)、抗霉枯草菌素 (mycosubtilin)、 杆菌霉素 (bacillomycin)等微生物源抗菌活性物质的鉴定、抑菌机理和安全性均得到了深入研究 。 ．然而 ， 目前微生物源防腐剂仍然存在产量低、价格昂贵等缺点，极大地限制 了其广泛应用 ，因此高产广谱抗菌活性 物质的菌种选育仍亟待研究人员不懈努力．本课题组从徐州周边土壤中分离筛选到了一株具有广谱抗菌活 性 的菌株 F69，本实验主要对其进行筛选 、鉴定． 1 材料与方法 1．1 材料 土壤样品分别采集于徐州的屠宰场、动物园、菜地 、树林 、菜市场等地． 1．2 试剂与仪器 试剂 ：菌株 DNA提取试剂购 自上海生物工程有限公司 (AMRESC()分装)；酵母提取物和胰化蛋 白胨购 自Oxoid公司；TaqDNA聚合酶 、dNTP为 TaKaRa公司提供 ；其他试剂均为国产分析纯． 仪器：PCR仪 (TECHNE公司)；凝胶成像系统(北京六一公司)；TGL一16G离心机 (北京瑞尔欣德科技 有限公司)；DYY一8C电泳仪 (北京六一仪器厂制造)． 1．3 培养基 采用牛 肉膏蛋白胨培养基． 1．4 抗菌活性测定指示菌株 指示菌株 ：枯草芽孢杆菌 (Bacillussubtilis)，蜡样芽孢杆菌 (Bacilluscereus)，巨大芽孢杆菌 (Bacillus 收稿 日期 ：20l2O2O8 基金项 目：江苏省高校 自然科学研 究项 目(11KJD180004) 作者简介 ：高兆建 (1976一)，男，山东沂南县人 ，讲师 ，博：}，主要从事微生物来源活性物质研 究 · 40 · 高兆建，等 ：一株产生广谱抗菌物质地衣芽孢杆菌的筛选与鉴定 megaterium)，苏云金 芽孢 杆菌 (Bacillusthuringiensis)，藤 黄微 球菌 (Mirococcuslu