牛胚胎发育早期MnSOD,Glut-1,Hsp70,IGF-Ⅱ,IFN-t基因表达差异的研究.pdfVIP

2011年 3月 第 1期 (总第 150期) 草食家畜 (季刊) H sp70， 牛胚胎发育早期 MnSOD，Glut-1， IGF—II．IFN—t基因表达差异的研究 孙美玉，陈静波 ，毋状元，郑新宝，董 红 ，霍 飞 (新疆畜牧科学院畜牧研究所 ，新疆 乌鲁木齐 830000) 摘 要 ：目的：研 究体外受精生产 的牛胚胎在发 育早期各个阶段 MnSOD，Glut—l，Hsp70，IGF—II，IFN—t基 因 的表达差异，阐明体外培养胚胎发育阻滞和胎儿发育异常的分子机理和胚胎 阻滞有关的 目的基 因，为完 善体外培养系统、提 高IVP胚胎质量和确保 IVP后代正常发育提供理论依据。方法 ：提取体外生产的不同 阶段牛胚胎总 RNA，以 B—actin 基 因为 内对照 ，用半定量 RT—PCR技 术检 测胚胎发 育各 时期 MnSOD， Clut—l，Hsp70，IGF—II，IFN—t基 因在 mRNA水平的表达情况。结果 ：在 卵母细胞 中，MnSOD及 IFN—t基因呈 高表达 ，Glut一1、Hsp70及 IGF一Ⅱ呈低表达 ；在 8一l6细胞 、桑葚胚及囊胚 中，MnSOD及 IGF一1I基 因呈 高表 达 ，而 Glut—l、Hsp70及 IFN—t基 因则呈低表达 。 关键词 ：体外胚胎 ；发育早期 ；基因表达调控 中图分类号 ：s814．8 文献标识码 ：A 文章编号 ：1003—6377(2011)01—0039—05 体外生产胚胎技术 (invitroembryoproduction， 过程 ，有多种转录因子 、细胞信号分子和细胞信号通路 IVP)是快速繁殖动物优 良品种 的技术于段 ，目的是获得 参与其 中_q。热休 克蛋 白(Heatshockproten70，HSP70) 大量优 良遗传性状 的胚胎 ，用于胚胎移植 。该技术包括 足哺乳动物细胞 内结构蛋 白，在所有细胞均有表达 ，并 体外成熟 (invitromature，IVM)、体外受精 (invitro 受热诱导有轻微升高 I，属结构型 HSP70，具有分子伴侣 fertilazation，1VF)、体外培养 (invitroculture，IVC)、精 于 功能 ，参与细胞耐热和细胞保护 、抗细胞凋亡 、抗氧化作 显微注射 (intracytoplasmicsperm iniection，ICSI)等 。但 用 ，并与肿瘤免疫 、肿瘤细胞凋亡密切相关 。大量 的研究 在 IVP培养过程 巾，不 同培养液培养 的胚胎发育能力均 表 明 ，胰 岛素样生 长 因子 (Insulin—likegrowthfactor， 劣于体 内胚胎 ，主要表现为胚胎细胞 团 致密 、色洋暗 、 IGF)能促进体外培养的卵母细胞成熟 0；参与卵裂过程 内细胞团形态异常 、细胞 内脂类物质积 累多 、细胞液中 的有丝分裂191，增加蛋 白质合成 ，促进卵泡的发育 、胚胎 线粒体密度异常 、表面微绒毛减少等 。牛胚胎体外培养 的生长和植入 Uo]，是重要 的胚胎生长和发育 的调节 因 在 8～16细胞发育期易发生阻滞 ，囊胚率低 ，严重制约体 子 。胚胎 T扰素 (Interferontau，IFN—t)是 I型干扰素的 外生产胚胎的推广运用。研究表明，这些差异是相关基 一 种 ，它是胚胎发出的妊娠信号 ，具有维持黄体功能的 因表达水平的改变引起 的。目前研究认为早期胚胎发育 作用。由此可见，这些基因在调控牛早期胚胎发育过程 阻滞可能原因是 IVP体外操作干扰了基 冈印记的形成 ， 中均起着重要的作用。 印记异常导致 印记基 因表达水平发生变化 ，从而也引起 本研究采用体外胚胎生产技术生产胚胎 ，研究胚胎 与之调控相关的基 因表达发生改变 ，影响胚胎和胎儿的 在不 同培养液 中各个 时期 的生长发育情况和 MnSOD、 正常