实时荧光定量PCR检测肾移植术后CMV-DNA的临床意义.pdfVIP

验均为阴性。 1．2免疫抑制方案 所有患者术后均采用环孢素(CSA)+骁悉@妇Ⅷ刁+强的松的三联免疫抑制治疗方案。 1．3检测方法 轻轻打入并轻微混匀。将此2ml混合血液沿试管壁缓缓加入到装有2ml淋巴细胞分离液的试管中，避免震荡 和混合。2500rpm，15分钟离心后，用加样枪吸出中间的细胞层于离心管中，12，000rpm离心5分钟，沉淀 加50ulDNA提取液打匀。100℃保温10±1分钟，12，000 扩增，测定按试剂盒(购自达安公司)说明书进行，仪器采用美国MX3000P实时荧光定量PCR仪。 1．4急性排斥反应的诊断 诊断依据为：(1)患者具有急性排斥的临床表现，如尿量减少、血cr升高、发热、血压高、蛋白尿等； 素或ATG)治疗有效。 1．5统计分析 应用SPSSl010软件进行统计学分析，阳性率和急排率比较采用x2检验。 2结果 2．177名肾移植受者29名检出CMV．．DNA，总阳性检出率为37．7％。 30．4％，见表1．采用x 表1急性排斥组与非急性排斥组CMV-DNA阳性检测结果 2．3 Real CMV-DNA，其病毒拷贝数值介于2．325103．1．02X10s，56名未发生急性排斥的患者中，17名患者检出 CMV-DNA，其病毒拷贝数值介于5．61×102。2．12X104。据数量级不同分组；见表2。检出率存在显著性 差异·(a=0．05，p0．05) 表2实时荧光定量PCR检测移植受者CMV载量的分布情况(％) 讨论 肾移植目前在国内外已广泛开展，是实质性器官移植中技术最成熟，术后病人生存时间最长的移植手 术。影响肾移植成功的因素诸多，其中各种病毒的感染对肾移植受者的生存率和生存质量有明显影响。 人类巨细胞病毒(human 和死亡的重要原因之一。在正常人群中具有较高的感染率，成人中为40％～100％【。初次感染后常里潜伏 感染状态，并在免疫低下(如器官移植后，AIDS等)时再活化而导致严重感染。移植受者的1／3会发展为 巨细胞病毒病，1／2会发生肺部感染，最终会导致50％的死亡率。感染早期，临床症状不明显，尽早检出 CMV感染情况及含量对于早期诊断及治疗具有极大的临床价值。目前检测HCMV的方法主要有：病毒分 离与培养：病毒分离的敏感性是最高的，而且特异性强，但受到多种因素的影响，如：环境条件要求高、 技术要求高、费时长、可重复性差等。血清学检测(ELISA)：血清学抗体检测简便、快速，但无法提供现 症感染资料，而且由于患者处于免疫抑制状态，有时难以产生可检测到的抗体，只能作为CMV的晚期诊 断指标。抗原血症方法(CMV-pp65)．抗原血症方法特异度好但操作繁琐、技术要求高，受实验人员主观 定量检测，诊断的敏感性和特异性都很高，在CMV感染的早期诊断中发挥了重要作用。实时荧光定量为 在PCR过程中通过荧光信号实时检测产物量，检测重现性好，定量结果准确，可用于体内HCMV的动态 监测，监测早期活动性感染，对临床诊断，早期合理抗病毒治疗，预防感染等方面有重要的指导意义。 移植术后CMV感染率较高。肾移植患者术后为防止排斥反应，大量使用免疫抑制剂，肾移植受者术后处 于免疫抑制状态，从而诱发潜伏的病毒激活，增加CMV感染的机率。有研究表明，CMV感染的频率及严 重程度与很多因素有关，其中最重要的就是肾移植受者的免疫抑制状态及免疫抑制程度。 明显高于未发生急性排斥反应的患者，说明巨细胞病毒感染可能与急性排斥反应有关。这与Razonablc的 研究报道相符。急性排斥反应更易使肾移植受者发生CMV感染，其机制可能是因为移植肾的免疫损伤导致 CMV感染的发生率。移植术 细胞因子的释放，其次，为控制急性排斥反应而加强免疫治疗也会明显增力l：l 后排斥反应发生的次数和抗排斥反应治疗的药物制剂和种类增加CMV病的发病风险。为了抗免疫抗排斥 毒感染的概率。许元文等的研究也表明急性排斥反应发生后免疫抑制剂尤其是ALG(抗淋巴细胞球蛋白) 态，所以病毒感染后常不显性表达，只是作为潜伏性感染存在。 有研究表明，巨细胞病毒感染也可以诱导急性排斥反应的发生。但由于本实验收集的标本例数相对较 和CMV病是同种异体肾移植临床上出现排斥反应的独立危险因素，另外一项大样本病例对照研究同样也 巨细胞病毒感染和急、慢性排斥反应有关以来，有关两者之间的因果关系争论不断。且前虽然还不能肯定 两