小鼠肝细胞的分离培养.pdfVIP

第 26 卷第 4 期 衡 阳 医 学 院 学 报 V o l. 26 N o. 4 1998 年 12 月 Jou rnal of H engyang M edical Co llege 1998 小鼠肝细胞的分离培养① 陈敏时　陈　新　刘传爱② (衡阳医学院流行病学教研室, 衡阳市, 421001) 摘　要　采用 0. 1% 的胰蛋白酶消化乳小鼠肝组织块, 用DM EM 培养基进行肝细胞的培养, 1 周后可见细胞生长, 30 d 左右细胞铺满培养瓶, 培养的肝细胞能分泌白蛋白, 培养第 20 天白蛋白分 泌量达高峰。 关键词　胰蛋白酶; 　肝细胞; 　分离培养 　　哺乳动物肝细胞不易在体外生长, 80 年代 供。 以来 国外采用两步胶原酶灌注法分离肝细 1. 3　肝细胞的分离和培养 [ 1 ] [ 2 ] 处死小鼠, 无菌分离肝脏, 置 液 胞 , 并以双层 鼠尾胶原凝胶培养 或肝细胞 D H ank s [ 3 ] 中, 冲洗肝脏至灰 白色, 将肝脏剪成 1 × - 非实质细胞混合培养 , 成功地进行了肝细 mm 胞的原代培养。但这些方法操作复杂, 价格昂 1 ×1 的组织块, 用 液洗 3 mm mm D H ank s 贵。我们采用胰酶消化、组织块培养的方法进行 次, 去掉血细胞, 37 ℃下用 0. 1% 的胰蛋白酶消 肝细胞原代培养成功, 现将结果报告如下。 化 10 , 倒掉消化液后用 液洗 2 m in D H ank s 次, 培养液洗 2 次, 将肝组织块贴壁于组织培养 1　材料与方法 瓶中, 每个培养瓶放组织块 30～ 35 块, 加少许 培养液, 将培养瓶倒转置于培养箱中, 在 37 ℃、 5% CO 2 条件下培养, 3 h 后补充 4 m l 培养液, 1. 1　试剂 并翻转培养基继续培养。第 1 周每 3 天换液 1 1. 1. 1　0. 1% 的胰酶　胰蛋 白酶 1 g , 加 D 次, 以后每 2 天换液 1 次。 H ank s 液 100 m l 溶解, 4 ℃过夜, 滤纸过滤除 1. 4　 白蛋白分泌的检测 菌, 调 pH 值至 7. 2 冷冻保存, 临用前用 D 换液时收集培养液, 离心去除浮游单个细 H ank s 液稀释。 胞及碎片, 以溴甲酚绿法检测上清液中白蛋白