环介导逆转录等温扩增技术RTLAMP在丙型肝炎病毒基因检测中的应用.pdfVIP

第 卷 第 期 病 毒 学 报 22 5 Vol.22 No.5 年 月 2 0 0 6 9 C INESEJOURNALOFVIROLOGY Se tembe 2 0 0 6p 环介导逆转录等温扩增技术（ ）在丙型肝炎 RT-LAMP 病毒基因检测中的应用 ， ， 1 1 2 1 1 2 1 1 2 李启明 ，马学军 ，周蕊 ，彭夫望 ，高寒春 ，匡治州 ，侯云德 （ 中国疾病预防控制中心 病毒病预防控制所，北京 ； 1. 100052 2. 北京金迪克生物技术研究所，北京 100176） 摘要：该文介绍了一种便捷、灵敏而又特异的环介导逆转录等温扩增基因检测技术，该技术分别使用特异对应于靶 序列中 个基因区段的 对特殊引物，并在反转录酶和 聚合酶的作用下对靶序列进行等温核酸扩增反 8 3 Bst-DNA 应，整个检测反应只需 。利用这种技术成功检测了丙型肝炎病毒基因，对 份经 或 1!2h 60 Real-timePCR RT-PCR 验证阳性的血清样品检测，阳性符合率为 。同时，对扩增终产物进一步进行酶切分析，并与 、 和不同 98% IV BV 亚型流感病毒RNA进行交叉反应和特异性测试，均与预期结果吻合。将Real-timePCR 定量后的RNA系列稀释 后对检测方法的灵敏度进行了测试。结果显示，该技术的检测灵敏度在理论上可达到 个拷贝的 分子。以 10 RNA 上结果证明， 扩增技术是一种检测程序简单、灵敏度和特异性较高的基因检测手段，在丙型肝炎病毒的 RT-LAMP 快速检测方面具有一定的开发潜力。 关键词：丙型肝炎病毒；环介导逆转录等温扩增；实时监控聚合酶链反应 中图分类号： + 文献标识码： 文章编号： （ ） R373.2 1 A 1000-8721 2006 05-0334-05 丙型肝炎病毒是一种常见的RNA病毒，它可 行，因此这种检测方法的特异性很高。相对于其它 以通过血液和母婴传播等方式感染人而造成丙型肝 传统扩增方法，尤其对RNA 的扩增，这种扩增很大 炎的流行。目前，在临床上丙型肝炎的实验室诊断 程度上提高了检测的灵敏度并节省了反应时间。因 还是采取传统的ELISA方法，即利用基因工程抗原 为其中的一对引物专门用于增加扩增模板而减少反 ［，］ 检测血清中的抗体。由于该病毒在感染早期不能产