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磷酸盐_柠檬酸缓冲液提取凋亡细胞小片段DNA方法的应用和改良.pdf
( ) ( )
·176 · 郧阳医学院学报 J YMC 2004 年 6 月 ,23 3 :176
[文章编号] 1006 - 9674 (2004) 02 - 0 176 - 03 ·实验技术 ·
磷酸盐/ 柠檬酸缓冲液提取凋亡细胞
小片段 DNA 方法的应用和改良
1 2 2 1
夏 飞 , 邓维秀 , 汤红明 , 刘胜武
(1 2 )
武汉大学医学院免疫学系 ,湖北 武汉 43007 1 ; 郧阳医学院免疫学教研室
[ 1～3 ] ( )
凋亡或程序化细胞死亡是一种不同于坏死的细 参照文献 配制磷酸盐/ 柠檬酸缓冲液 p H7 . 8 :
胞死亡方式 ,是细胞的主动性 自杀过程[ 1 ] 。随着近 0 . 2 mol/ L N a HPO 溶液 192 ml 和 0 . 1 mol/ L 柠檬
2 3
年来人们认识的深入及检测方法的不断进步 ,越来 酸 8 ml 混合 ; 0 . 25 % ( v/ v) N P40 ; 1 mg/ ml 蛋 白酶
越多的证据表明免疫细胞及其组织细胞发生的凋亡 K ; 1 mg/ ml RN aseA ;0 . 5 ×TB E 电泳缓冲液 ;70 %乙
与许多临床疾病的发生发展密切相关 。 醇 ;DNA loading buffer : 0 . 25 g 溴酚兰 , 30 %甘油 ,
70 %蒸馏水 。
在检测细胞凋亡的多种方法中 ,通过凝胶 电泳
( ) 6
取 1～2 ×10 胸腺细胞 ,重悬于 5 ml 70 % 乙
得到的寡核苷酸片断或其多聚体的梯带状图像是证
醇 ,于 - 20 ℃固定 4～6 h 后 ,1 000 g 离心 5 min ,去
明凋亡发生的重要依据 。而对寡核苷酸片段或多聚
除乙醇 ; 随后 0 . 5 ml PB S 重悬细胞 , 同法离心弃上
体提取方法的差异会直接影响凝胶 电泳的最终结
μ
清 。将细胞重悬于 40 l 磷酸盐/ 柠檬酸缓冲液 ,置
果 。在检测细胞的数 目较少或细胞整体凋亡率偏
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