PERK信号因子在染氟成骨细胞样细胞基因表达的变化.pdfVIP

±Ⅲ量勰芏趣垂』u生J璺』jta基盟蓝—些iu捌曲d』出htL越U』d出 ml PBS冲洗细胞．每个样品孔加1T“∞I(美国 laviuogen公司)提取RNA。 1．2反转录厦宴时PCR：取1炖总RNA经引物 『 。 ol删(胛)”(日奉Tak嘲公司)在反转录酶Rever TmAce(日本Toyobo公司)作用下合成cDNA。本实 验使用ABI Bi删mkm． 7500them。cycler仪(Applied Fester uISYBRPcRr瑚mermix jJ也o。 City，c^)，果州20 (日本Toyobo公司)反应体系进行定量PCR．分析 1…t1…”∞E‘m i—unoglobulinprotein)、PERK(PRK— BiP(binding ■I女■m■■■#m|mPt目^tim IikeER factor hansefipfioa k一)、ATF4(activating 组表选明显上调；同样的．染氟10d的4、10“l以 2-mIatedfaemr 4)、Nn2(nuelⅢfactor 2)、 offlhwid d的l、 组PERK基因显著上调。另一方面。船氟4 cM8l㈣Kndl”gk【ordPhaILOPG(oEt。口p”t。舻”n) 4n以组OS732细胞该基因表达明显下降。 factor B 和RANKL(BucIHrkappaligand)基因水平 变化。反应条件是94℃1min，95℃15s。57℃20s、 平如隔3所示。染氟10 72℃32 s．40个循环。Glyeeraldehvde-3-phospbote 胞ATF4基网表达明显上酒。Nrf2基田表达上调主 Ocbydm舭oa∞(G^PDH)作为内参基因。 要出现在染氟1d的4 d的4、 m∥L组和染氟10 binding 13半定量PCR基因xbp—I(x_boxpmtein 10mg／L组0s732细胞。然而．染氟4d不同氟浓度 1)在引物介导FPCR扩增成289 bp片段(德国 Biometra PcR仪)。其中GAPDH作为内参。取PCP, 降。上述结果显示PERK信号通路在氟诱导OS732 产物在进行2％琼脂糖凝腔电泳所得条带的光密 细胞的内质同应激反应中碉显地变化。 度使用Tan叫GL％900密度扫描仪和GISID软件进 行数据分析。 lg．0 1．4统计分析：数据以*±j表示．使用SPSS 统计软件进行统计分析．组间比较采用LSD和 DUNCAN法进行显著性棱验．检验水准为005。 2结果 z1 d的 BiP基凼的表选壹化：如图I所示．奥氟I ’l艟_J 4Ⅱ叽组0S732绑胞BiP基因表达水平明显比对