岩藻甾醇对人白血病HL-60细胞增殖和凋亡影响.pdfVIP

尤会论文 岩藻甾醇对人白血病HL．60细胞增殖和凋亡的影响 150076：2眉家教育部抗肿瘤天然药物工程研究中心，哈尔滨150076) 活性。结果7．1 人髓系白血病细胞株HL-60增殖，并诱导其凋亡。 关键词：岩藻甾醇；HL-60细胞；细胞增殖；细胞凋亡 的体外抗肿瘤活性，但作用机制尚不明确。本实验采用MTT比色分析法检测、细胞形态观察、流式细胞 分析等方法研究岩藻甾醇对人自血病HL-60细胞增殖和凋亡的影响，并对其机制做了初步探讨，以期揭 示岩藻甾醇在治疗白血病方面的潜在价值，为进入临床研究奠定基础。 1材料与方法 1．1材料 1．1．1主要材料与试剂 人旱幼粒白血病HL-60细胞株(哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心留存)；胎牛血清(杭 州四季青生物工程材料有限公司)；RPMI 甾醇(象山康瑞达生物工程有限公司，纯度≥90％)。 1．1．2 主要仪器 亭科学仪器厂)等。 1．2方法 1．2．1细胞培养 RPMI．1640培养液中，37。C、5％C02孵化箱传代培养，取对数生长期细胞进行实验。 1．2．2 MTT法检测岩藻甾醇对HL．60细胞生长抑制作用 ·259· 201 1年全国医院药学学术年会暨第71届世界药学大会卫星会 算出IC50。 空白对照组平均oz0莹一给药组平均0ID值 细胞抑制率％=——×100％ 空白对照组平均雠 1．1．3荧光显微镜观察细胞形态学变化 将对数生长期的HL．60细胞接种于6孔培养板，加入等量不同浓度岩藻甾醇，阳性药组加入等体积 33258染色液，37℃避光孵育30min，荧光倒置显微镜下观察细胞形态变化。 1．2．4流式细胞仪检测HL-60细胞周期及细胞凋亡率 加入2．5mL 发波长488nm，发射波长520nm测定细胞周期和凋亡率。 I．2．5岩藻甾醇对Caspase．8，Caspase．3活性的影响 书。 1．2．6统计学处理 所有数据均用叉士s表示，采用SPSSl7．0统计软件进行组间t检验，P0．05认为有统计学意义。 2结果 2．1 岩藻甾醇对HL-60细胞增殖的抑制作用 不同浓度岩藻甾醇对HL．60细胞增殖均具有抑制作用，随着药物浓度的增加，作用明显增强，具有 ·260- 大会论文 Effectoffucosteml ofHL击0cells F嘻l ON小oproliferation 2．2荧光显微镜观祭细胞形态学变化 清晰，染色质分布均匀．不同浓度的岩藻甾醇作用于HL-60细胞48h后，可见已破碎的核．折光性减弱， 可见致密的强荧光，这反映了细胞已经进入凋亡。给药浓度剂量组7I]xg／mL中部分细胞体积及缅胞核变 小、皱绾．并可见弼亡小体．如图2c箭头所示．随着药物浓度的增加．凋亡细胞比例逐渐增加，凋亡细 胞特征性形卷更加明显．礴亡小体增多。给药浓度284．g／mL剂量组中大部分细胞棱裂解为碎块，如图 2E箭头所示。见图2。 }。矗．．．·■：；。；?；：：?1J E∑?蔓I!茎鐾型 D ruc。mr。】+I E Fuc。slcr。：!q 4姐#+mL j峪”l Fi吝2 appearanceofIlL-60ce[Isbyfluorcscenccdetection Mo甲hol晒cal 2011年全国燕院药学学术年台噩第7l届世界药学大会卫星台 2．3流式细胞仪检测HL60细胞周期及细胞凋亡辜 64％，14 的凋亡率髓药渡浓度的升高而增多，呈一定的剂量依赖性，浓度7lgg／mL组嗣亡率为15 2}Lg／mL 组捅亡辜为16 例降低，G，M期细胞比例升高，井呈一定的剂量依赖性，表明岩藻甾醇使HL咖肿瘤细胞周期阻滞