四种人癌术后转移动物模型的建立及生物学特性的研究.pdfVIP

第七届中南地区实验动物科技交流会论文汇编 动物模型 四种人癌术后转移动物模型的建立及其生物学特性研究 徐冰1，姚明2，顾为望1，闫明霞2，刘蕾2，张杰2 (1．南方医科大学实验动物中心，广州510515；2．上海市肿瘤研究所实验病理室，上海200032) 【摘要l 目的建立人癌术后转移动物模型，观察不同瘤源所建模型生物学特性的差异。方法肿瘤生长至 小鼠模型，观察动物的生存状态和体内转移情况。结果GBC对照组裸小鼠8周时未发现体内转移；术后组lO周 周。SMMC-7721对照组和术后组动物出现衰竭体征时均未发现体内转移，切瘤后动物生存期延长6周。结论皮下 移植瘤切除后，可以延长动物生存期，提高体内转移发生率，但是否发生高转移与瘤源自身的生物学特性有关。 【关键词】肿瘤切除手术；肿瘤转移；疾病模型；动物 肿瘤术后转移的研究，对肿瘤临床治疗学发展甚为蓖要。研究肿瘤术后转移就必须建立和临 床相近的术后转移动物模型，但目前尚缺乏此类动物模型。利用临床上肿瘤切除后出现复发转移 的情况，对建立的移植性肿瘤动物模型，实施肿瘤手术切除，是建立术后转移动物模型的可行方 法。本文利用不同瘤源建立人癌术后转移动物模型，并对它们的生物学特性进行了观察和比较， 可为肿瘤术后转移动物模型的研究和应用提供参考。 l 材料与方法 1．1 实验动物 料、饮水、标准饲料及其他与动物接触的物品均经高压灭菌处理。 1．2 移植瘤来源 GBC为人胆囊癌细胞株，购自中科院上海生命科学院生物化学与细胞生物学研究所；HCT一116 为人结肠癌细胞株，由上海市肿瘤研究所提供；NCI-H460为人非小细胞肺癌细胞株，由国家癌基 因及相关基因重点实验室惠赠：SMMC-7721为人肝痛细胞株，由一}：海市肿瘤研究所提供。以上细 胞均以肿瘤皮下移植方式由上海市肿瘤研究所实验病理室保存和传代。 1．3 皮下移植瘤模型的建立 取出皮下传代的荷瘤裸小鼠皮下移植瘤，浸入含青霉素、链霉素各lOOU／ml的生理盐水中， 选择生长良好、无坏死、呈鱼肉状的瘤组织，剪切成直径约2衄的小块，用20号套管针移植至 裸小鼠皮下。建模后观察小鼠一般活动、营养状态及移植瘤的潜伏期、成瘤率和生长情况。 1．4 术后转移模型的建立 皮下移植瘤长至直径约1．5cm左右，行皮下瘤切除手术，具体操作如下：(1)实验组动物以 速眠新(1．2ml／kg)腹腔麻醉；(2)皮肤常规消毒后于肿瘤旁切开皮肤，用手术剪剥离肿瘤，注意 血管的剥离和肿瘤包膜的剔除，避免因出血过多而造成动物死亡，同时要把肿瘤全部切除以免在 568 动物模型 第七届中南地区实验动物科技交流会论文汇编 手术部位肿瘤二次复发；(3)缝合皮肤。术后逐日观察动物的生存状态。 1．5 解剖学和组织学检查 动物出现衰竭体征时全部处死，未切瘤动物肉眼观察移植瘤成瘤率、生长潜伏期、肿瘤坏死 及体内脏器以及淋巴结转移情况，切瘤动物应注意有无复发和体内转移。主要脏器用10％中性福 尔马林固定，石蜡包埋，切片，经苏木精一伊红染色，光镜下观察。 2 结果 2．1 肿瘤生长情况及小鼠生存状态 间均比未切瘤动物的生存时间增加(表1)。 6BC裸小鼠皮下移植瘤生长潜伏期约为1周，6N时肿瘤有轻度坏死，8周时动物消瘦；切瘤组 术后未见肿瘤复发，至lO周时出现消瘦、弓背体征。 HCT—116裸小鼠移植瘤1周后可见肿瘤生长，随后肿瘤进入对数生长期，4周时部分动物所荷 肿瘤出现坏死，随着时问的延长，裸小鼠逐渐消瘦，9周时，荷瘤裸小鼠出现弓背、精神萎靡等 衰竭体征；切瘤组裸小鼠术后次日正常采食、饮水，术部无肿瘤复发，至17周实验结束，未出现 明显消瘦、精神萎靡等衰竭体征。 NCI-H460皮下移植瘤的生长潜伏期为5天，前期生长较快，瘤体表面有完整包膜，4周出现轻 度坏死，与周围有不同程度的粘连，血管丰富，10周时所携瘤体严重坏死，动物消瘦。切瘤组未 见肿瘤复发，14周时出现明显消瘦，弓背，精神萎靡等体征。 S!$tC-7721皮下移植瘤生长潜伏期约为4周，5周时生长较快，16周时动物有消瘦、弓背体征； 切瘤组22周时出现衰竭体征。 2．2 体内转移结果观察 经解剖及病理学检测，GBC对照组裸小鼠至衰竭处死时未发现体内转移；切瘤组至10周衰竭 未发现淋巴结肿大以及其他器官异常；经过切瘤的15只裸小鼠中，17周实验