急性再生障碍性贫血病程各阶段FoxP3-＋调节性T细胞的变化.pdfVIP

JIANGXIJOURNALOFTRADITIONALCHINESEMEDICINE 急性再生障碍性贫血病程各阶段 FoxP3+调节性 T细 胞的变化 ★ 赵瑞玲 胡致平 周郁鸿 (1．浙江省临安市中医院 杭州 313300；2．浙江省 中医院 杭州 310006) 摘要：目的：观察急性再生障碍性贫血(简称急性再障)患者治疗前、治疗后第3、6个月各阶段CIM CD25 Foxp3调节性T细 胞 (regulatoryTcells，Treg)的变化。方法：采用临床病例观察的研究方法。所有入组病例均采用统一的治疗方案。用流式细胞 术分别检测急性再障患者治疗前、治疗后第3、6个月时的外周血CIM CD25Foxp3Treg数量，以15例正常健康体检者作为 对照。结果：15例急性再障患者发病初期外周血CIM CD25Foxp3Treg占CIM CD25T细胞的(10．59±3．86)％，明显低 于fi_常对照组的(32．91±10．16)％(P0．01)，有统计学意义；治疗后第3个月时cD4CD25Foxp3Treg数量为 (18．86±7． 53)％，较治疗前增加 (P0．01)，且明显低于正常对照组(P0．01)，有统计学意义；治疗后第6个月时CIM CD25Foxp3 Treg数量为(28．31±3．36)％，明显高于治疗前(P0．01)和治疗后第3个月(P0．叭)，有统计学意义，与正常对照组相比 无明显差异(P0．05)，无统计学意义。结论：急性再障患者发病初期时免疫紊乱最重，cD4CD25 Foxp3Treg含量最低 ，经 治疗后，随着病情的好转Treg含量逐渐增加，治疗后第6个月时免疫紊乱明显减轻，Foxp3Treg含量已接近正常。 关键词：急性；再生障碍性贫血；调节性T细胞 中图分类号：R392．2 文献标识码：B 再生障碍性贫血是免疫因素介导的自身免疫性 2mL淋巴分离液中，置人离心机 以200Or／分，离心 疾病。调节性 T细胞作为具有抑制 自身免疫反应 20分钟后，用吸管吸取 白膜层，分离获得单个核细 的免疫调节细胞，能对潜在的、具有伤害性的自身反 胞，计数细胞后，调整细胞浓度至 l×10／mL。测定 应性细胞进行调控，在诱导、维持和预防自身免疫耐 管和对照管均取50~LPBMNC，分别加入CIM—Per- 受中扮演着重要的角色，这些功能特点使得调节性 cp、CD25一FITC各 20t~L，充分混匀，室温避光孵育 T细胞在再生障碍性贫血发生发展过程 中起着极其 30分钟，加入冷PBS2mL洗涤 1次，1500r／分，离心 重要的作用 。为此，我们用流式细胞术检测了 5分钟，弃上清，加入新鲜配制的固定液 100~L，轻 急性再障患者治疗前、治疗后第 3、6个月外周血 柔混匀，4~C避光30分钟。加入破膜液 100~L，轻柔 CIM CD25Foxp3Treg表达水平 ，以探讨该细胞与 混匀，避光5分钟，用新鲜配制的PBS缓冲液 2mL 急性再障的关系。 洗涤 1次，测定管加入Foxp3一PE20L，轻柔混匀， 1 资料与方法 对照管加入鼠抗人阴性对照 IgG120t~L，轻柔混匀， 1．1 临床资料 以符合 《再生障碍性贫血的诊断 于4℃避光封闭30分钟，用新鲜配制的PBS缓冲液 和疗效标准》 诊断要求的急性再障患者为观察对 2mL洗涤 1次，弃上清，加入 0．5mLPBS，充分混匀， 象。全部病例来 自浙江省 中医院 2008年 7月 一 4小时内上流式细胞仪检测。采用EPICSxL流式 2010年 3月的住院患者，所有入组病例采用统一的 细胞仪进行检测，应用 CellQues软件分析细胞 。在 治疗方案(兔抗人胸腺细胞免疫球蛋 白(ATG)+雄 FSC—SSC散 图点上获取淋巴细胞群，以CIM 和 激素+环孢菌素 +细胞因子)，由于治疗过程中使 SSC设 门选择 CIM 阳性细胞分析 CD25表达，选择 用药物使实验指标受到影响，患者死亡、出院等原因 CIM CD25 T细胞分析