青蒿素类药对A549和Hela细胞体外抗肿瘤活性的研究.pdfVIP

JIANGXIJOURNALOFTRADITIONALCHINESEMEDICINE 关键词：青蒿素类药物；A549细胞；Hela细胞；体外抗肿瘤活性 中图分类号：R285．5 文献标识码 ：A 青蒿素 (artemisinin，ART)是我 国研究人员 东海普药业有限公司生，生产批号：；低糖 1971年从菊科植物黄花蒿叶中提取分离到的一种 DMEM、HEPES均购 自美 国GIBCO公司；小牛血清购 含有过氧桥结构的倍半萜 内酯类化合物，此后陆续 自广州畜牧场 (批；L一谷氨酰铵和 MTI 开发出青蒿琥酯 (Artesunate，ATS)、双氢青蒿素(di_ 均购 自Sigma公司；其他相关产品为国产试剂。 hydroartemisinin，DHA)、蒿甲醚 (artemether)等多种 1．2 肿瘤细胞 非小细胞肺癌 A549和宫颈癌细 青蒿素类药物。最初青蒿素为一种高效、低毒的抗 胞Hela，引 自美 国ATCC，由广州中医药大学热带医 疟药物，尤其是脑型疟和恶性疟有效。近来学者研 学研究所病毒实验室冻存传代保管。 究发现青蒿素具有抗肿瘤功效，对多种肿瘤具有抑 1．3 仪器 美国宝特ELX800型全 自动酶标仪；全 制、杀伤作用 ¨I4J，有希望被开发成为新型的抗肿瘤 自动 CO 孵箱(上海力 申科学仪器有限公司，型号： 植物药。本研究以非小细胞肺癌 A549和宫颈癌 HFg0)；倒置显微镜 (日本 Olympus，型号CK40)；海 Hela细胞为对象，采用 四甲基二氮唑蓝 (MTI)法检 尔生物安全柜 (青岛海尔特种电器有限公司，型号： 测ART、DHA及ATS的体外抑制活性，观察不同青 HR40—11A2)；SW—CJ—TF超净工作台(苏州安泰 蒿素类药对不同肿瘤细胞的抗肿瘤作用 。 空气技术有限公司)。 1 实验材料 2 实验方法 1．1 药品与试剂 青蒿素 (广州汉方现代中药研究 2．1 细胞接种 A549和Hela细胞常规复苏后，待 有限公司，批号为 100651)；双氢青蒿素(重庆华立武 细胞生长至一定数量后，用 0．25％胰酶消化 1～ 陵山制药有限公司，批号为 C00320110704—2)；青蒿 5min，终止消化，并用含 10％血清的DMEM培养基 琥酯 (重 庆华立 武 陵山制药 有 限公 司，批 号 为 重悬细胞。计数后用完全培养基调整细胞浓度为 ；5一氟尿嘧啶注射液(简称 5一Fu，上海旭 5．0×10／mL，按0．1mIJ~L接种于 96孔细胞板上， $ 基金项 目：广东省科技计划项 目(项 目编号：2010B030700066)。 通信作者：刘亚军，E—mail：liuyajun@sina．com．cn。 · 22 · 江西中医药2014年2月第2期总45卷第374期 37oC，5％CO，条件培养。 2．2 A549和 Hela细胞生长曲线的绘制 按 2．1 方法接种细胞，于接种后每 24h做一次M1Tr染色。 每天取4个复孔细胞进行 Mr[T染色，分别连续 12 天和9天。最后结果 以细胞M1Tr染色 0D490为纵 坐标，实验时间为横坐标，绘制出A549和Hela细胞 图2 Hela细胞 的动 态生长 曲线 的生长曲线 。 到96h基本处于稳定的平台期，96h之后经历一个 2．3 加药处理 待细胞贴壁培养 1～2d后，吸掉原 缓慢凋亡期，A549第4d达到顶峰，Hela细胞第 5d 有培养基，将药物分别配制成一定浓度，并对半稀