皮状丝孢酵母脂肪酸CoA连接酶Facl基因的克隆与分析.pdfVIP

2015年1月 中国粮油学报 V01．30，No．1 第30卷第1期 oftheChineseCerealsandOilsAssociation Jan．2015 Journal 皮状丝孢酵母脂肪酸CoA 连接酶(Facl)基因的克隆与分析 尚常花 王忠铭 袁振宏 朱顺妮 秦 磊 吕鹏梅 (中国科学院可再生能源重点实验室中国科学院广州能源研究所，广州510640) 摘要从皮状丝孢酵母(Trichosporon 及其5’一上游序列进行了分析。根据前期的基因组文库测序结果，获得了898DNA序列。以此为基础，2 bp 2365 次使用染色体步移(Genome bp和l bp7一DNA序列。根据获得的5和3端 walking)方法，分别获得了854 个1662 bp的开放读码框，DNA不舍内含子序列。同时获得了482bp的5’一上游序列。在5’一上游序列区域存 在一系列预测的顺式作用元件。相似性分析的结果表明z 列相似性最高。该研究旨在为后继的Facl基因的功能和表达的研究、油脂代谢的遗传改造奠定基础。 关键词 皮状丝孢酵母Facl基因5，_上游序列序列分析 中图分类号：Q789文献标识码：A 文章编号：1003—0174(2015)01—0071—05 随着化石能源即将耗竭以及生态环境13益恶 程技术对zcutaneum产油性能进行改造。 化，可再生能源受到全世界的青睐。作为可再生能 源的一员，生物柴油因其具备可生物降解、清洁、无 和CoA合成脂酰CoA。它通过将游离脂肪酸活化为 毒和可再生等优点，引起人们的广泛关注…，同时， 它们的CoA硫酯，在不同的代谢和调控过程中发挥 与传统的石化柴油相比较，生物柴油具有相似的化 着重要作用，包括油脂生物合成、脂肪酸降解、中间 学特性旧J。目前，生物柴油主要是利用植物油制备， 代谢、基因表达、三酰甘油掺人、信号转导和基因表 然而大规模发展植物来源的生物柴油将需要占用大 达调控一‘10|。Facl催化的反应通过两步进行。首 量土地以及导致食用油短缺。在这种情况下，微生 先，脂肪酸和ATP反应生成脂酰一AMP和焦磷酸。 物油脂成为生物柴油的可持续原料。 产油微生物因具备可产生大量油脂、生长迅速 AMP。根据碳链的长度，脂肪酸可以被划分为3种 及所产生油脂的脂肪酸组成与植物油相似等特点， 被认为是一种可选择的生物柴油原料口一J。已经发 C16)。与Facl在细胞代谢中的多种功能相对应，许 现许多微生物可以积累油脂，包括细菌、酵母、微藻 多微生物含有可利用不同长度碳链脂肪酸的Facl同 和丝状真菌。 工酶‘¨12I。 cutaneum)是一种可 皮状丝孢酵母(Trichosporon 鉴于Facl在油脂代谢调控中的重要功能，本研 cutane— 以同时利用葡萄糖和木糖的产油酵母怕J。r 究从Z Izm不仅可以利用葡萄糖和木糖，还可以利用各种生 分析。该工作为以后Facl基因的功能分析、超量表 物质的水解液，包括玉米芯的酸水解液∞‘7o和大米草 达研究、抑制表达研究及对rcutaneum油脂代谢的 的水解液博。等，因此，rcutaneum用于制备生物柴油