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农杆菌介导石斛兰遗传转化的研究.pdf
园 艺 学 报 2008, 35 (4) : 565 - 570
A cta Horticu lturae Sin ica
农杆菌介导石斛兰遗传转化的研究
张妙彬 , 梁擎中 , 肖 浩 , 岑 鹏 , 范干群 , 潘丽晶
(珠海市农业科学研究中心 , 广东珠海 519070)
摘 要 : 利用根癌农杆菌介导转化石斛兰类原球茎 ( PLB s) , 研究了石斛兰对潮霉素的敏感性 , 并通
过 g us瞬时表达率比较不同类型农杆菌 、侵染液浓度及乙酰丁香酮 (A S) 等对石斛兰转化的影响 。结果表
明: 带有 pCAMB IA 130 1的根癌农杆菌 (A g robacterium tum ef aciens) EHA 105 (简称为 E1301) 比带有相同表
达载体的 LBA4404 (简称 L 1301) 对石斛兰的转化效率更高 , 前者约为后者的 6 倍 ; 较高浓度的侵染液转
( )
化效率更高 OD600为 10或 12 时的转化效率约为 OD600为 06或 08 时的 2倍 ; 在农杆菌生长至 OD600值
为 08时 , 添加 A S可提高转化效率 ; 而当 OD600为 06、10和 12 时 , 添加 A S反而不同程度地降低转化
效率 ; 在各种处理中 , OD600为 10 时不添加 A S的转化效率最高 , 达 444 % 。经过 5 ～6个月选择培养 , 抗
性小苗经 GU S染色 、PCR 和 Sou thern杂交检测证明为转基因植株 。
关键词 : 石斛兰 ; GU S; 根癌农杆菌 ; 转化 ; Sou thern杂交
中国分类号 : S 682 3 1 文献标识号 : A 文章编号 : 0513353X (2008)
Study on A g roba c ter ium m ed ia ted Tran sform a tion of D en d rob ium
ZHAN G M iaob in , L IAN G Q ingzhong, X IAO H ao, CEN Peng, FAN Ganqun , and PAN L ij ing
( Z huha i A g ricu ltu ra l S cience R esea rch Cen tre, Z huha i, Guang dong 519070, Ch ina)
A b stract: D end robium ekap ol ‘Panda 1 ’wa s tran sform ed by A g robacterium tum ef aciens. The sen sitivity
of D end robium to hygrom ycin and tran sform ation effective factors such a s differen t strain s of A g robacterium ,
bacterium concen tration and aceto syringone ( A S) were studied by tran sien t gu s exp re ssion. The re su lts
showed that the tr
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