免疫组织化学染色技术的应用体会.pdfVIP

重鏖墨堂!!塑±!!墨墨i!查壁丝塑 9331 ·经验交流· 免疫组织化学染色技术的应用体会 宋客 (重庆市肿瘤研究所病理科400030) 摘要：目的探讨免痘蛆奴化学染色技术的应用。方法免疫组织化学染色技术是一种多步骤，多目素决定的实验方法， 有很多干扰因素，无论是组织取材、固定、删片、抗原暴露厦修复，液体厦抗体的配制，修复温度、显色等等因素都会影响免疲组织 化学染色。结果提高免疫组织化学染色技术，是为了制作出优良的克疫组织化学切片，提高病理诊断水平。结论免疫组织化 学染色技术特异性强、灵敏度高、定位准确等优点应得到最为广泛的推广和应用。 关键词：免疫组织化学染色；技术与方法 中图分类号：R361．2 文献标识码：B 文章编号：1671—8348(2007)22—2331。02 免疫组织化学(IHC)染色技术作为病理实验室的常规工断，还容易在染色过程中发生脱片。常规制片过程中要特别注 作以及科研工作的常规技术，是在组织化学的方法上结合免疫 意组织切片薄、完整、无刀痕．烤片的温度和时间要适度-烤片 学的理论和技术发展起来的一门新技术．也是近年发展很快的 温度对组织内抗原有不同程度影响，烤片时温度过高，可造成 一门学科．以其特异性强、灵敏度高、定位准确，井可直接定性 组织内抗原的破坏。温度低，时间不足，染色时易发生脱片。 和定量的形态学观察等优点得到了最为广泛的推广和应用。 所以在制片时，将蜡膜熔化后放人60C的烤箱内烤片过夜。 它不仅提高了病理诊断的准确性，也渗透到了基础和临床学 这样不仅可避免抗原破坏，而且还可防止染色过程中脱片现 科，在疾病的诊断、判断预后、指导临床治疗、了梓发病机制和 象。 检测病原体等方面起到了不可估量的作用。但足免疫组化染 4抗原暴露及修复 色技术是一种多步骤、多因素决定的实验方法，存在很多干扰 免疫组化染色的成败与组织切片中抗原物质的暴露和抗 因素‘“，甚至会出现不理想的染色结果，从而易造成判断的错 原性的恢复方法有着十分密切的关系。目前在免疫组化实验 误。为了制作出优良的免症组织化学切片，提高病理诊断水 中．抗原修复是影响染色结果的最关键因素。大多数采用酶消 平，作者回顾了近年来所进行免疫组织化学染色，现将体会介 化法或加热抗原修复两种方法。酶消化法是最早的抗原修复 绍如下。 方法，消化酶的作用在于能够暴露因组织固定而导致的抗原央 1组织损伤 定簇的封闭，以增加染色效果。此法应特别注意消化酶最佳浓 组织的损伤包括机械损伤、组织变干。组织的机械损伤可 发生在多个环节，如手术钳取活检造成的挤压、制片过程造成 的浓度、时间。消化酶浓度高(0．03蹦)，时间长(超过 切片的划痕等。病理技术人员在整个制片过程中应细心操作， 10rain)．会破坏组织抗原性，同时增加背景染色，给诊断增加难 避免损伤组织；组织变干是由于组织固定不及时或组织没有完 度；单纯加热抗原修复方法操作简单．经济，但对于封闭牢固的 全浸泡在固定液中，致使组织变于。另外，在免疫组化染色过 抗原决定簇暴露得不够理想}高压加热抗原修复方法比较简 程中，由于试剂投有完全覆盖组织也是组织变千的原因。组织 单．消耗时间短，价格便宜、经济实用，但是也发现高压加热的 变干后蛋白变性．抗原性丧失，表现为不着色或一片棕色。因 温度和时间掌握不当．会发生非特异性抗原暴露，增加背景染 此，在整个组织处理制片的过程中应避免组织坐干。 色。微波加热抗原修复方法目前应用也比较广泛t微渡方法使 2固 定 抗原决定蔟充分暴露，并使组织的通透性提高，反应加快，使变 免疫组化染色技术要求组织离体后立即固定，理想的组织