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·经验交流·
免疫组织化学染色技术的应用体会
宋客
(重庆市肿瘤研究所病理科400030)
摘要:目的探讨免痘蛆奴化学染色技术的应用。方法免疫组织化学染色技术是一种多步骤,多目素决定的实验方法,
有很多干扰因素,无论是组织取材、固定、删片、抗原暴露厦修复,液体厦抗体的配制,修复温度、显色等等因素都会影响免疲组织
化学染色。结果提高免疫组织化学染色技术,是为了制作出优良的克疫组织化学切片,提高病理诊断水平。结论免疫组织化
学染色技术特异性强、灵敏度高、定位准确等优点应得到最为广泛的推广和应用。
关键词:免疫组织化学染色;技术与方法
中图分类号:R361.2 文献标识码:B 文章编号:1671—8348(2007)22—2331。02
免疫组织化学(IHC)染色技术作为病理实验室的常规工断,还容易在染色过程中发生脱片。常规制片过程中要特别注
作以及科研工作的常规技术,是在组织化学的方法上结合免疫 意组织切片薄、完整、无刀痕.烤片的温度和时间要适度-烤片
学的理论和技术发展起来的一门新技术.也是近年发展很快的 温度对组织内抗原有不同程度影响,烤片时温度过高,可造成
一门学科.以其特异性强、灵敏度高、定位准确,井可直接定性 组织内抗原的破坏。温度低,时间不足,染色时易发生脱片。
和定量的形态学观察等优点得到了最为广泛的推广和应用。 所以在制片时,将蜡膜熔化后放人60C的烤箱内烤片过夜。
它不仅提高了病理诊断的准确性,也渗透到了基础和临床学 这样不仅可避免抗原破坏,而且还可防止染色过程中脱片现
科,在疾病的诊断、判断预后、指导临床治疗、了梓发病机制和 象。
检测病原体等方面起到了不可估量的作用。但足免疫组化染 4抗原暴露及修复
色技术是一种多步骤、多因素决定的实验方法,存在很多干扰 免疫组化染色的成败与组织切片中抗原物质的暴露和抗
因素‘“,甚至会出现不理想的染色结果,从而易造成判断的错 原性的恢复方法有着十分密切的关系。目前在免疫组化实验
误。为了制作出优良的免症组织化学切片,提高病理诊断水 中.抗原修复是影响染色结果的最关键因素。大多数采用酶消
平,作者回顾了近年来所进行免疫组织化学染色,现将体会介 化法或加热抗原修复两种方法。酶消化法是最早的抗原修复
绍如下。 方法,消化酶的作用在于能够暴露因组织固定而导致的抗原央
1组织损伤 定簇的封闭,以增加染色效果。此法应特别注意消化酶最佳浓
组织的损伤包括机械损伤、组织变干。组织的机械损伤可
发生在多个环节,如手术钳取活检造成的挤压、制片过程造成 的浓度、时间。消化酶浓度高(0.03蹦),时间长(超过
切片的划痕等。病理技术人员在整个制片过程中应细心操作, 10rain).会破坏组织抗原性,同时增加背景染色,给诊断增加难
避免损伤组织;组织变干是由于组织固定不及时或组织没有完 度;单纯加热抗原修复方法操作简单.经济,但对于封闭牢固的
全浸泡在固定液中,致使组织变于。另外,在免疫组化染色过 抗原决定簇暴露得不够理想}高压加热抗原修复方法比较简
程中,由于试剂投有完全覆盖组织也是组织变千的原因。组织 单.消耗时间短,价格便宜、经济实用,但是也发现高压加热的
变干后蛋白变性.抗原性丧失,表现为不着色或一片棕色。因 温度和时间掌握不当.会发生非特异性抗原暴露,增加背景染
此,在整个组织处理制片的过程中应避免组织坐干。 色。微波加热抗原修复方法目前应用也比较广泛t微渡方法使
2固 定 抗原决定蔟充分暴露,并使组织的通透性提高,反应加快,使变
免疫组化染色技术要求组织离体后立即固定,理想的组织
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