Notch信号通路在肝脏缺血再灌注损伤中的作用及作用机制.pdfVIP

2011中国外科周论文汇编 书面交流 近年有报道证实，Notch信号参与了细胞对于外界刺激控肝脏IRI中的作用，从而揭示Notch信号通路调控肝 的应答，在心、脑缺血性损伤中都有Notch信号途径的脏IRI中肝细胞ROS的分子机制。7．通过将肝细胞与过 参与。Notch信号是否参与肝脏IRI过程?Notch信号表达Notch配体DIllOP-9细胞共培养或过表达Hes5 在肝脏IRI中的作用如何?Notch信号在肝脏IRI中发激活Notch信号，观察激活Notch信号对肝细胞IRI的 挥作用的分子机制是什么?这些问题的阐明将为IRI相 影响。 关的研究开辟新的领域，进一步完善肝脏IRl分子调控 结果1．在肝脏IRI中伴随着Notch信号途径的广泛激活 理论体系，为肝脏IRI的预防和治疗提供理论基础。 及下游分子的表达上调：在肝脏IRI中，Notchl、 目的研究Notch信号通路在肝脏IRI中的作用，作用的 mRNA表达上调、NlCD Notch；7．、D114、Jagged2、Hes5 细胞生物学基础及分子机制，探索肝脏IRI新的分子调 蛋白表达明显上调。2．阻断Notch信号会导致肝脏I刚加 控机制，为肝脏I冈的预防和治疗提供新的理论依据。 重。表现为：血清ALT、AST水平升高；肝细胞凋亡、 方法1．以无创动脉夹夹闭小鼠肝脏左叶、中叶血供90 坏死增加；中性粒细胞、T细胞、巨噬细胞浸润增加， min，制造小鼠肝脏IRI模型，利用ReaMimePCR检 炎症因子TNFa、ILl B、IL6、IFNy，趋化因子CCL3， 测Notch信号通路相关分子在肝脏IRI中的表达变化，粘附分子ICAMl产生增加。3．阻断Notch信号引起肝 利用Westernblot检测Notchl受体胞内段的表达水 脏IRI中肝细胞细胞内ROS产生增加，并且，应用ROS 平。2．利用PCR方法鉴定小鼠基因型，获得 清除剂可以挽救Notch信号阻断引起的血清ALT、AST Mx-Cre．RBP．J价纯合子小鼠及Mx-Cre．RBP．jf／*杂合子升高，肝细胞凋亡坏死增加，说明Notch信号阻断引起 肝细胞内ROS水平升高，最终导致IRI加重。4．进一步 对照小鼠，Polyl．PolyC诱导，在纯合子小鼠中剔除 RBP-J基因，实现阻断Notch信号。通过检测血清ALT、分子机制的研究证实：阻断Notch信号导致下游分子 AST水平，组织学HE染色，TUNEL凋亡染色，MPO免 Hes5表达下调使得Hes5．STAT3复合物形成障碍，导 疫组织化学，流式细胞仪检测相关炎性细胞浸润情况， 致STAT3磷酸化水平下降，引起MnSOD表达下调， ReaMime PCR检测炎症因子表达水平，观察阻断 最终导致细胞内ROS水平升高，过表达持续激活 Notch信号对肝脏IRI的影响。3．通过分别将RBP-J剔sTAT3可以上调MnSOD表达，降低细胞内RoS水平， 除和对照小鼠全骨髓细胞移植给致死剂量照射的野生型 挽救IRI中Notch信号阻断引起的细胞凋亡增加。5．体 小鼠，获得在骨髓细胞特异剔除RBP-J小鼠及对照小 外配体激活Notch或过表达Hes5对肝细胞I刚起到保 鼠，行肝脏IRI造模，通过血清ALT、AST检测、组织护性作用，表现为细胞内ROS水平下降，细胞凋亡减 学HE染色、TUNEL凋亡染色，观察骨髓细胞阻断少。我们的研究结果说明，经典Notch信号途径通过其 Notch信号对肝脏IRI的影响。4．体外应用GSI阻断下游分子Hes5协助STA_r3的激活，进而引起MnSOD Notch信号，利用肝细胞体外缺氧(0．5％)培养15h， 表达上调，降低细胞内ROS水平，在IRI中对肝细胞 正常培养基常氧培养6h，模拟IRI，通过TUNEL凋亡起到保护性作用。 mRNA水平检测，损伤后剩余活细 结论1