山楂叶片中黄酮类物质的提取工艺与检测.docVIP

山楂叶片中黄酮类物质的提取工艺与检测 一 实验目的 1 复习可见分光光度计的使用 2 学习超声波提取成分的方法 3 掌握利用分光光度计测定含量的方法 二 实验原理 1 主要试剂 芦丁对照品（购自中国药品生物制品检定所）,硝酸铝（Al(NO3)3.9H2O,分析纯）,亚硝酸钠(分析纯),氢氧化钠（分析纯）,无水乙醇（分析纯，天津大茂化学试剂厂）,山楂叶片（采摘于本校校园）。 2 主要仪器 FA1064N型电子天平（上海精密科学仪器有限公司） SK8200HP超声清洗器（59 KHz，220 V，500 W，功率可调范围为40%-100%，上海科导超生仪器有限公司） UV-2550紫外可见分光光度计（日本岛津公司） 循环水式多用真空泵（SHB-III，郑州长城科工贸有限公司） 四 实验内容 1 对照品溶液的配置 准确称取芦丁对照品0.0124 g于100 mL烧杯中，加入10mL无水乙醇溶解，再加入10mL蒸馏水，然后将溶液定量转移至50 mL容量瓶中，再用50%乙醇定容至刻度，摇匀，避光保存。（ρ= 248 mg/L） 2 标准系列的配制及待测液的显色 准确移取芦丁对照品溶液0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 mL至25 mL容量瓶中，分别加入5％亚硝酸钠1 mL，放置5 min 后，加10％硝酸铝2 mL，放置6 min，再加4％的氢氧化钠3mL，显色完毕后加50%乙醇至刻度，摇匀待测。 3 样品的前处理 将随机采集的山楂叶清洗干净，于烘箱中烘干(102℃，2 h)，粉碎碎后过20目筛，备用。 c-在标准曲线查得的黄酮浓度mg/L；ms-称取山楂叶的质量g 4 乙醇浓度对黄酮提取结果的影响 准确称取1.0000 g粉碎好的山楂叶样品六份置于6只150 mL具塞锥形瓶中，分别用50%的乙醇30 mL 浸泡13 h。在300 W的功率下，超声提取15 min，用相应浓度的乙醇润洗抽滤瓶，布氏漏斗和滤纸，用循环水真空泵抽滤，并用相应浓度的乙醇溶液少量洗涤锥形瓶及布氏漏斗数次，一并抽滤。将滤液定量转移至100 mL容量瓶中，用相应浓度的乙醇溶液定容，摇匀，制成待测液。 准确移取待测液4.00 mL于50 mL容量瓶中，按标准系列中显色步骤显色，（注意所加试剂要加倍。），在最大吸收波长下测定吸光度。 五 数据记录与处理 1.标准曲线 1 2 3 4 5 19.840 29.760 39.680 49.600 59.520 0.156 0.234 0.312 0.393 0.465 R=0.99986 Y = A + B * X B=0.00783 A=0.0012 2.实验数据 1 2 3 4 5 36.443 34.806 33.718 34.822 35.533 0.287 0.274 0.265 0.274 0.280 R=0.99983由线性方程计算得 1 2 3 4 5 平均 0.287 0.274 0.265 0.274 0.280 0.276 36.501 34.840 33.691 34.840 35.607 35.096 含量ω 45.626 43.55 42.114 43.55 44.509 43.870 六 实验讨论 1.由于实验提取之前未浸泡导致含量偏低。 2.实验提取测定中可能由于操作原因，导致一组数据偏低，未采用。 序 号 浓 度 吸 光 度 序 号 浓 度 吸 光 度 序 号 吸 光 度 浓 度