中药调控骨重建多靶点的细胞、分子模型研究.pdfVIP

第四次中华中医药科技成果论坛论文集 势大鼠模型上证明雌激素缺乏，导致成骨和破骨细胞表达的雌激素受体d、B比例发生改变。生理状态下成骨 细胞雌激素受体B表达高于雌激素受体Of．，但雌激素对骨形成的作用主要由转录活性更高的雌激素受体d决 赳引。雌激素还可通过受体结合途径，诱导破骨细胞周期阻滞和细胞凋亡，直接抑制破骨细胞骨吸收活性。事 实上，成骨和破骨细胞的相互作用并非成熟阶段开始，对于它们来源的前体骨髓细胞，这种相互调控机理既已 发生。如血中富含的磷酸鞘胺醇(SIP)可促进破骨细胞前体一血液单核细胞趋化，分化为成熟破骨细胞H】。破 定向成骨细胞分化，促进骨形成【5】。成骨细胞也能分泌抑制破骨细胞分化的因子女llSema3A【6-7J。可见，维持骨 重建的稳定并非由成骨或破骨细胞各自独立的功能决定，而是由调节成骨和破骨细胞功效的相关细胞共同参 与，影响彼此的发生、发展、功能行使的全过程。因此，任何针对单一指标或单一细胞的药物调控都有可能引 起其它与之相互作用细胞的负面影响或反馈调控。这一点在一些治疗骨质疏松的西药中得到体现。如抑制骨 吸收的双磷酸盐药物也同样抑制了成骨细胞的骨形成能力。 基于以上分析，骨重建实际上涉及了骨髓间充质干细胞、前破骨细胞、骨细胞、调节骨微环境的雌激素释放 细胞卵泡颗粒细胞等。因此，我们体外构建了骨髓前体细胞和远端组织性腺的卵泡颗粒细胞间接接触的、功能相 对完整的骨重建三细胞共培养模型(图1)，将更加拟合骨重建的发生发展过程及微环境。这种模型不仅可同时 评价骨的来源、骨形成、骨吸收和雌激素释放等多种相互关联的活性，而且非常适合评价中药多靶成分，群以及 多靶点整合调节机制，缩小细胞实验与动物、人体的药效实验数据的差异，加快中药现代研究的步伐。 同时，我们也看到，对共培养模型稳定性的要求、定量方法的选择和实验条件的优化都要高于单培养模 。骨髓间充质干细胞 O破骨前体细胞 。卵泡颗粒细胞 喜△ ：：盛 OS -· ·+ ·+ 口GC RAW RAWJMSCIC47． 袖r--i |：{面I 网1骨重建的细胞共培养模型建立 注：OS：骨分化诱导剂，包括100nmol／L地塞米松、1mmol／L13．甘油磷酸钠、5斗mol几磷酸维生素c。 型。我们探索了共培养体系中骨髓间充质干细胞(MSC)骨向分化的特征指标碱性磷酸酶(ALP)和前破骨细胞 发现细胞经共培养后，增加了ALP的活力，同时刺激了共培养体系的雌激素水平(图1)。 目前，细胞模型多采用二维单层培养，这与机体三维的骨组织生理特点有所差异。建立借助于生物材料的 三维构架的细胞共培养模型有可能更加接近体内真实环境【8】。如在肿瘤细胞的三维培养中，就有利用胶原凝 胶培养肺癌细胞的三维模型，发现一些重要的化疗药物在二维和三维模型上表现出活性的差异【9】。另外，三维 模型中生物材料的选择也很关键，对材料的生物相容性和可降解性等要求也是体外模拟机体真实环境的关键 要素。 第四次中华中医药科技成果论坛论文集 基于靶点相关网络探讨中药调控骨重建的作用机制 共培养形成的细胞网络实际上是分子信号网络的形成，这与网络药理学【10l的思路很吻合，有利于揭示中 药调控骨重建的多靶点作用机制。药物调控成骨细胞分化成熟的信号转导途径主要涉及3条：除了雌激素受体 活化途径外，有砸·t途径和BMP途径u¨。Wnt蛋白为胞外富有半胱氨酸的糖蛋白，能够调节胚胎发育期骨重建 5／6，