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第28卷，第1151 光谱学与光谱分析 2008年11月 and November，2008 SpectroscopySpectralAmalysis 利用FCLA特征荧光实现单态氧和超氧的高灵敏检测 魏言春，罗世明’，徐未 华南师范大学激光生命科学研究所，暨激光生命科学教育部重点实验室，广东广州510631 摘要活性氧(R()s)的检测对生物学和医学研究很多领域方面具有重要意义，如光动力治疗肿瘤的治疗 检测、植物应激反应检测、种子活力检测等。实现活性氧中的单态氧、超氧阴离子高灵敏度的检测，是人们 luciferin 追求的目标。研究发现单态氧、超氧的选择性化学发光探针FCIA(fluoresceinylcypridina analog)氧 化后，在515n／n处荧光会大大增强。利用这个性质并结合非常成熟的荧光检测方法，可以实现活性氧的高 灵敏度检测。尤其在微观检测方面，如单细胞，F℃I。A的化学发光很微弱而难以检测到。但是却可以灵敏地 检测到其荧光变化。RLA荧光检测不仅灵敏度高而且选择性好。其无毒和易于透膜的性质更适于在细胞和 生物体上应用。另外如果同时结合FCLA的化学发光，对单态氧和超氧阴离子的检测将更准确、更具实时 性。 关键词FCLA；单态氧；超氧阴离子；荧光 中图分类号：0657．3文献标识码：A 一系列活性氧如单态氧、超氧阴离子、过氧化氢、羟自由基 引 言 等都可反应，这在选择性检测方面，限制了检测的可信度。 比如对高活性的单态氧的检测。 活性氧包括单态氧、超氧阴离子、过氧化氢等具有氧化 化学发光法检测活性氧是常用的研究方法[I引。FCLA是 特性的氧自由基。活性氧在许多生命活动中被释放，内源性 CLA类活性氧化学发光探针中的一种。它只与活性氧中的 或外源性产生的活性氧对生命体都会产生重要的影响u。3]， 超氧阴离子、单态氧反应[1“15]，具有选择性强，灵敏度高的 因此很多地方需要检测活性氧尤其是寿命短、氧化性高的单 优点。另外FCLA已被证明其不仅可以轻易透过细胞膜，而 态氧的存在[4]，活性氧的检测在研究生命活动中具有重要的 且对生物体没有毒性，尤其适于细胞和在体的检测[16,17]。但 意义。如光动力治疗肿瘤(Pcrr)过程中，人们利用光敏剂通 是在应用化学发光检测活性氧时。我们注意到其在单细胞的 过能量传递把三线态的氧激发为单线态氧，利用其强烈的氧 微观场合由于信号很弱已难以检测到发光信号。然而，实验 化作用杀伤肿瘤细胞，使肿瘤细胞坏死或者凋亡ls．e]。因此表明FCLA的特征荧光强度在氧化后会大大增强，利用荧光 光动力治疗剂量的监测就是单线态氧的监测[7]。植物种子活 的显著变化特征并结合灵敏的荧光检测技术用来检测单细胞 性和植物胁迫应激反应监测也常常用到活性氧的检测。活力 中单态氧和超氧阴离子具有很大的可行性。 强的种子在受到刺激时会产生大量的单态氧，因此通过检测 单态氧的多少即可知道种子的活力[81。植物叶片受到环境胁 1实验部分 迫时也会应激产生活性氧，现在人们常常通过检测植物的这 种反应来判断环境情况和植物的生存状态L9]。其他还有吞噬 1．1试剂 活性氧探针FCLA(FreeAcid KaseiK0． 细胞的吞噬研究、激光作用细胞的应激研究等[10]，这些生命 FCLA，Tokyo 过程都与活性氧的参与有关，检测和观察活性氧的产生和变 gyo 化对探明药物、光刺激、环境影响等