黄瓜花药愈伤组织细胞的染色体制片技术.pdfVIP

河北农业科学，2011，15 (3)：80—8I，85 JournalofHebeiAgriculturalSciences 编辑 索相敏 黄瓜花药愈伤组织细胞的染色体制片技术 刘海英 ，张运峰 ，-汜44-水~山 ，吴永宾。，甄志芹。 (1．唐山市农业科学研究院，河北 唐山 063000；2．唐山师范学院生命科学系，河北 唐山 063000) 摘要：在成功获得黄瓜花药愈伤组织的基础上，探 索了利用愈伤组织分化产生的根尖细胞进行染色体制片的技 术方法，为通过花药途径进行黄瓜单倍体育种的早期染色体倍性鉴定奠定了基础。 关键词 ：黄瓜 ；花药；愈伤组织诱导；染色体制片 中图分类号：Q943．1 文献标识码：A 文章编号：1008—1631(2011)03-0080-02 ChromosomePreparationofCallusInducedfrom CucumberAnther LIU Hai-ying ，ZHANG Yunfeng ，FAN Yong—shan ，WU Yong．bin ，ZHEN Zhi—qin。 (1．TangshanAgriculturalInstitute，Tangshan 063000，China；2．DepartmentofLifeScience，TangshanTeachersCollege， Tangshan 063000，China) Abstract：Basedonthesuccessfulinductionofcucumberanthercallus，thechromosomewaspreparedusingtheroottip cellsdifferentiated from anthercallus．Theresultsprovided importanttechnique supportforearly chromosomepolidy determinationofcucumberhaplidbreedingbythewayofcucumberanther． Keywords：Cucumber；Anther；Callusinduction；Chromosomepreparation 采用单倍体技术选育黄瓜品种，可快速产生纯合的 1．2．1 黄瓜 花药的愈伤 组织诱导 取 长度 为 0．9～ 育种新材料 ，缩短育种年限。获得黄瓜单倍体的途径主 1．5cm的唐山秋瓜的雄花 置于放有少许蒸馏水的烧杯 要包括花药培养、子房培养以及辐射花粉授粉诱导3种 中，然后放在4℃冰箱中预处理，72h后将花蕾用75％ 人工途径 ¨ 。黄瓜花药可 以通过胚状体和愈伤组织 酒精浸泡30S，0．1％升汞消毒 15min，再用无菌水冲洗 2种途径获得单倍体植株 。利用花药愈伤组织获得单 3～4次。无菌条件下，剥取花药分别接种于花药愈伤 倍体植株的一个难点是再生植株的染色体倍性鉴定 比较 组织 诱 导 培 养 基 (MS+2，4-D 1．0mg／L+6-BA 困难，主要原因是通过花药途径再生出的植株，往往是 1．0mg／L+IAA0．5mg／L+蔗糖 50 L+琼脂 7g／L)， 单倍体、双单倍体及其他倍性植株的混合群体。因此， 25℃暗培养2周；然后于光照16h／d、光强度2000lux 如果在愈伤组织阶段就能够鉴定其染色体倍性，就可以 条件下培养，观察愈伤组织诱导情况。 避免再生植株群体过大和倍性鉴定工作繁重等问题。本 1．2．2 黄瓜花药愈伤组织的根分化 将淡黄色、结构 研究提供了一种利用花药愈伤组织分化产生的根尖进行 致密的愈伤组织和淡绿色、结构疏松的愈伤组织分别接 染色体制片的技术 ，为提前进行黄瓜花药单倍体育种的 种到根分化培养 基 (MS+NAA 0．05mg／L+6-BA 染色体倍性鉴定提供了依据。 2．0mg／L+蔗糖 30g／L+琼脂7 L)，培养30d。观察 2种