基于SSR标记的黄桃种质资源亲缘关系分析.pdf

落叶果树2014，46(4)：05一07 眈cid∞獬nM弧 ·试验研究· 基于SSR标记的黄桃种质资源亲缘关系分析 陈传爱，王宁，秦士超，荣恒，孟庆杰+ (聊城大学生命科学学院，山东聊城252059) 摘要：利用sSR标记技术对12个黄桃品种(系)进行遗传多样性检测。结果发现，SSR标记能够揭示 材料间的遗传多样性，从蔷薇科苹果属35对SSR引物中筛选出8对扩增稳定的特异性引物，构建其指纹图 谱。8对SSR引物共扩增出78条DNA片段，其中“条具有多态性，多态性比率为54．6％，材料间的遗传相 似系数在0．64～0．88之间，平均为O．759。通过聚类，从分子水平对黄桃品种(系)的遗传关系进行分析，并 对12份黄桃种质材料进行了SsR标记分类，为黄桃种质资源的研究利用提供参考。 关键词：黄桃：亲缘关系；SSR标记 中图分类号：S662．1文献标识码：A 文章编号：1002—2910(2014)04一O005—03 黄桃属蔷薇科桃属植物，原产中国…，年产约50万t，深受消费者青睐。随着近代大规模的商业生产，异 地间品种交换频繁，加之长期以来我国黄桃品种缺乏有效的登记管理，因而造成了品种资源的混乱。近年来 DNA分子标记技术已用于桃属植物的遗传多样性分析，为黄桃的起源提供了证据。鉴于黄桃在中国桃生产 中的重要位置，笔者对目前我们选育的12个具有良好性状的黄金冠桃‘21等品种(系)，进行了ssR分析，旨 在了解黄桃的遗传多样性分布情况，为种质资源的利用和开发提供依据。 1材料与方法 1．1 材料 试验分析于2013年春季进行，所用黄桃材料均取自于聊城大学试验园黄桃树幼叶，共计12份，分别是 交2号、10．锦绣实生4号、11．选早1号、12．实生6号。 1．2 DNA提取 采用CTAB法[31提取黄桃叶片的基因组DNA，并进行DNA样品的浓度和纯度的测定。 1．3 SSR—PCR反应体系的建立 1．3．1主要试剂与引物引物、lO×PCR DNA聚合酶和dNTP，均购自康为世纪。选择来自蔷薇 Buffer、Taq 科苹果属35对ssR引物HJ。 个因素。运用正交试验的方法对反应体系中的模板、引物、Taq酶、dNl甲4个因素分别设置3个不同水平进 行PCR反应体系的优化。4个因素及其水平设置(表1)。 1．3．3 DNA模板，引物(10mM) ssR扩增反应体积为25灿，内含10×PcRBu虢r(含MgCl2)2．5此，50ng O．15“L，dNTPmix(10mM)O．2斗L，Taq 收稿日期：2014—02—14 基金项目：聊城大学科技创新项目(sF2012171)；山东省科技攻关项目(2009Gcl0009031)。 +通讯作者：孟庆杰(1960一)．女，山东阳谷人，副教授，主要从事植物学教学及研究工作。 作者简介：陈传爱(1990～)，女，山东邹城市人，现主要从事园艺植物资源研究工作。E—mail：呲n鲥69@126．com 万方数据 6 落叶果树 第46卷 温度采用引物中的较低的Tm(DNA熔解温度)值。 表1 PCR反应体系正交试验的因素及水平设置 1．4多态性引物筛选 2)，对12个黄桃品种(系)进行遗传多样性分析。扩增产物用8％聚丙烯酰胺凝胶分离‘5|，银染技术检 测‘6l。 表2 SSR引物及扩增产物的多态性水平 1．5数据分析 按照电泳图谱中同一位置上DNA带的“有”、“无”进行统计，有带的记为“l”，无带的记为“O”，形成o／1 矩阵图输人计算机。采用N1：SYs—pc2．10软件进行uPGMA聚类分析。 2结果与分析 2．1 SSR标记的多态性分析 性。 2．2聚类分析 一类包括实生晚3号、锦绣实生4号、实生5号；第二类包括实选早1号、选早1号、黄金实、黄金冠、杂交2 号、实生6号、黄金魁、实选早2号、杂交l号。 万方