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吉林省第四届科学技术学术年会 1023 肿瘤微卫星异常改变的研究进展 卿海燕 刘 冰 (吉林大学基础医学院医学遗传学教研室长春130021) 摘 要：肿瘤作为一种遗传疾病，严重威胁着人类的健康。微卫星的异常改变(MSI和LOH)与肿瘤的 发生发展有密切关系。利用微卫星检测技术可以寻找并定位与癌症相关的重要基因，确定癌前病变组织。 微卫星检-测技术的应用，将为临床肿瘤的预防、早期发现及治疗提供重要的依据。 关键词：微卫星不稳定性 杂合性缺失肿瘤，基因 患恶性肿瘤的人群日益增加，且更趋于年轻化，严重威胁着入类的生命和健康。现代肿瘤分子生物学 研究证实，人类肿瘤的本质是一种基因病，其发生机制十分复杂，涉及一系列遗传学改变。微卫星是广泛 分布于生物基因组中的DNA重复序列，与许多重要基因紧密连锁【l】。近年来，微卫星分析作为一个敏感的 遗传指标，成为肿瘤研究的新热点。现就近几年国内外关于肿瘤微卫星异常改变的研究进展综述如下： 1微卫星及微卫星异常改变 列，是一类高度多态性的遗传标记。微卫星序列定位于基因的启动子，基因编码区，内含子及其与外显子 交界区，通过改变DNA结构或与特异性蛋白结合而发挥其基因调控作用。据估计，人类基因组携带至少 10万个微卫星，约有15000个标志物覆盖人类所有染色体，可由数据库获取。微卫星异常是基因组不稳定 的重要分子标志。主要表现为：(1)微卫星不稳定性(microsatellite of 即微卫星重复单元的增加和丢失。在扩增片段长度多态性分析中，表现为肿瘤组织DNA出现而非肿瘤组 织中不出现的额外的带，或肿瘤的一个等位基因与非肿瘤组织相应等位基因相同，而另一等位基因的位 置发生改变。肿瘤中微卫星的LoH比MSI更常见。是指一个位点上两个多态性等位基因中的一个出现突 变或缺失。通过检测肿瘤细胞染色体上某一区域等位基因位点的缺失。常被用来寻找并定位与肿瘤发生 相关的肿瘤抑制基因(tumor suppressor 滑动导致重复序列中1个或多个碱基的错配；(2)MS同源重组导致碱基对的丢失和插入。现在的研究结 果倾向于前一机制。肿瘤组织MSI的诊断目前尚无统一标准，参照美国国立癌症协会的标准，推荐了首选 DNA两种等位基因的相对强度与正常组织的等位基因相对强度的比值(AlleleRatio，RF)，作为判定依 据，RF0．667或1．50时，表示该位点发生了LOH。 2 MSI和LOH参与肿瘤发生发展 通常情况下，体细胞中小卫星DNA基因的突变频率为5x10之，而微卫星DNA的突变频率为10。5～10-7， 因此，微卫星DNA的稳定性可作为衡量细胞基因组整体稳定性的良好标记，并广泛用于肿瘤基因组不稳 定性的研究，LOH提示肿瘤抑制基因的键失和失活，与MSI共同被认为是基因组不稳定的两个主要表型 1024 增强自主创新能力 促进吉林经济发展 特征，在肿瘤的多步骤发生过程中起着重要作用。产生MSI的主要原因是错配修复(mismatch repair，MMR) 功能缺陷，不能正常发挥错配修复作用。MMR缺陷所致的MSI通过DNA的复制和细胞分裂而被保存在 基因组中，增加了其他基因的不稳定性，进而出现整个基因组的不稳定性，导致细胞增生及分化异常，从 而促进肿瘤的发生。微卫星的杂合性缺失被认为是肿瘤发生机制之一。根据Knudson的抑癌基因失活的 “二次打击”假说，发生LOH的染色体区域存在TSG，因此LOH是发现抑癌基因的有效的分子遗传标志。抑 癌基因的失活常伴有邻近的微卫星多态标记的丢失。我们可以通过微卫星标记观察癌组织的某一染色体 区域，若出现频发的微卫星标记的LOH，提示目标区域可能存在与所研究肿瘤相关的抑癌基因。目前国内 外多数实验室一般通过选择位点特异性引物对微卫星DNA进行PCR扩增后，再采用变性聚丙烯酰胺凝 胶电泳一银染方法显示分析结果。微卫星改变分析可以较快地定位肿瘤DNA的丢失及片断DNA长度的 改变，研究肿瘤的发生与基因改变的关系，寻找癌变时丢失的抑癌基因，并对可能存在的抑癌基因进行精 确定位，为肿瘤早期诊断