条斑紫菜多糖的含量测定及部分理化性质的研究.pdfVIP

条斑紫菜多糖的含量测定及其部分理化性质研究 周存山。马海乐 (江苏大学生物于环境工程学院) [摘要]条斑紫菜经脱脂．浸提，除蛋白。醇沉。超滤和脱色得精制多糖。Molish反应和Fehling反应定性 鉴定一依次稀释法测定特性牯度．Dodgson法涮定硫酸基含量，苯酚一硫酸法测定多糖含量．井用精 制多糖测得对半乳糖的换算因子．结果表明。此测定方法简便灵敏．供试液在3h内显色稳定，重现 好的线性关系，r=O．99945．特性粘度适中[q]=34．26XlO,L／g．硫酸基台量较高为2l83±O．11％ (n=2)。 [关键词】 条斑紫菜多糖；苯酚一硫酸法；特性牯度；硫酸基；含量测定 紫菜是我国的～种重要的经济藻类，属名PorphyraC．Agardh，隶属原红藻纲，红毛菜目， 红毛菜科，紫菜属。现代药理研究证实，紫菜多糖具有抗凝血、降血脂、降血糖、消炎、抗衰 老和防止溃疡等多霪生物活性功能“11。 紫菜中多糖含量的测定对于提取紫菜多糖所用原料品种的选择及提取工艺的优化评价都具 有重要的意义。许多“…有关紫菜多塘的研究都是建立在以葡萄糖作标准曲线的基础上，得到的 也就是多糖的相对含量．还有就是乘以校正系数0．9来修饰，然而，实际上YasukoYoshizwa 等等”1”报道．紫菜多糖是杂多糖，且半乳糖含量比葡萄糖高．达到水溶性多糖的64．2％．加 上不同单糖及不同单糖组台与苯劲-硫酸试剂显色情况不同．因而采用葡萄糖作标准得到的相对 含量或者乘以校正系数的测定结果，难免会有误差，结果较真实含量往往偏低。本文采用苯酚一 硫酸比色法“”，井用精制紫菜多糖测定出箕对半乳塘的换算因子．对条斑紫菜多糖含量进行了 测定-结果更接近真实含量，同时还测定了其表现粘均分子量特征的特性粘度及表现藻类多糖 活性功能所必须的硫酸基含量，希望能为紫菜多糖的功能研究提供参考。 1．材料与仪器 1．1材料 条斑紫菜，江苏省南通市海安县兰波实业有限公司：无水乙醇、石油醚(沸程60--90℃)、 氯仿、正丁醇、丙酮、乙醚、半乳糖、苯酚、硫酸、硫酸铜、酒石酸钠钾、硫酸钾、三氯乙酸、 氯化钡、明胶、盐酸等都为国产分析纯。 1．2仪器 l 型超滤系统，美国Mil ipore公司。 2．实验方法 2．1紫菜多糖的提取与精制“州 2．1．1紫菜多糖的提取 醇=20：4：l，v／v)反复进行6次脱蛋白后．搅拌卜慢慢加入4倍体积的无水乙醇，r4℃静置 ．43． 紫菜粗多糖。称重．计算得率，4℃保存备用。 2+1．2紫菜多糖的精制 称重，计算得率，4℃保存备用。 2．2标准曲线的绘制 2．2．1半乳糖标准液的配制 度，即得浓度为0．0458mg／mL的D一半乳糖标准液，4C保存备用。 2．2．2苯酚试液的配锚 ℃馏分)加20mL蒸馏水使之溶解，置4C避光保存。6％苯酚：临用前以80％苯酚配制。 2．2．3标准使用液的设置 试管中且都用蒸馏水补至2．Oral。 2．2，4苯酚一硫酸法测定“” 分别于“2．2．3”标准使用液中依次加入6％苯酚溶液1．OOmL、浓硫馥5．OOmL，摇匀，静 样方法做空白调零，以横坐标为半乳糖的毫克数，纵坐标为吸光度^．-一．得标准曲线及回归方 程，如图1。 2．3换算因子的测定 摇匀，得样品溶液。按“2．2．4”的方法测定，并由回归方程计算出半乳糖含量．按公式(2—1) 计算出换算因子。 换算因子f=—=!： (2—1) L●p ‘e8t吒 为多糖的稀释倍数。 圈1苯酚一硫酸法铡定多糖含量的标准曲线 ．44． 2．4紫菜中多糖含量的测定 2．4．1紫菜多糖溶液的准备 于lOOmL容量瓶中。加蒸馏水稀释至刻度，摇匀备用。 2．4．2紫菜申多糖含量的测定 的方法测吸光度，由回归方程计算供试液中多糖含量，按式(2—2)计算样品中多糖的含景。 (2—2) 多糖含量(％)=fo…Ce0×100％ ∥ 子，w为相应的样品重量(g)。 2．5重现性试验 斑紫菜多糖含量