污水再生处理系统隐孢子虫与贾第鞭毛虫密度检测方法的建立.pdfVIP

第四届环境模拟与污染控制学术研讨会论文集 污水再生处理系统隐孢子虫和贾第鞭毛虫密度检测方法的建立 张彤胡洪营宗祖胜 (环境模拟与污染控制国家重点联合实验室，清华大学环境科学与工程系，北京，100084) 一．研究背景 隐孢子虫和贾第鞭毛虫(后简称“两虫’’)是严重危害水质安全的病原性原生动物。 1623方法是目前国际上唯一一套检测两虫的标准方法。该方法基于饮用水水质进行的 参数设计，成本高、回收率低且不稳定，本论文通过对比1623方法主要环节的替代方 案，考察不同水质条件下两虫密度检测回收率的主要限制步骤，建立适用于污水再生处 理系统的两虫密度检测方法。 二．研究方法 参照1623方法的三个主要步骤：浓缩_分离一鉴定，分别进行对比试验。采用荧 光微球作为示踪物质，并通过投加两虫非定量阳性标样提高试验精度。浓缩环节对比了 化学絮凝法和膜过滤法对两虫的浓缩效果。其中，絮凝法采用氯化铁和聚合氯化铝两种 絮凝剂，膜过滤后选择膜溶解、刮擦和洗脱三种方式回收沉淀物质。在免疫磁性分离 (IMS)环节，考察了酸解离(0．1M 种磁珠与两虫的解离方式。观察免疫荧光染色(IFA)的假阳性现象，确认简化方案。 三．结果与讨论 1．浓缩方法选择 1．1化学絮凝 在铁絮凝试验中，收集沉淀进行lMS和lFA后通过显微镜检只能观察到暗红色的铁 絮体(如图1)，没有检测到两虫。主要是因为在后续的IMS过程中铁絮体的吸附影响 了磁珠吸附，破坏了两虫的收集过程，以及絮体的包裹作用使两虫难以被染色和观察到。 在PAC投加试验中，理论上，两虫从上清液中的去除率与从沉淀中的检出率应当 一致。然而，试验结果并非如此(如图2)，可能是由于在较高的投加量下形成的铝絮 体非常密实，将两虫包裹在其中，直接影响了后续的分离和染色过程，回收率明显降低。 蝌 瞒 泓 慨 |§ 慨 一 图1铁絮凝法浓缩两虫的显微镜检结果 图2PAC絮凝法浓缩后上清液和沉淀中的两虫检出量 1．2膜过滤法 试验发现颗粒物质的附着使滤膜无法完全溶解于丙酮中，严重降低了回收效果。表 2结果显示，与洗脱法(隐孢子虫和贾第虫分别为80．0％和82．9％)相比，刮擦操作回收 率不高(25．5％和48．8％0，并且受具体操作过程影响较大，非常不稳定。结合洗脱法与 膜溶解法的两次对比试验结果(如表1)，膜过滤一洗脱法是相对理想的两虫浓缩方式。 2．分离环节的解离方法 通过对比，如图3、4所示，酸解离的回收率明显较高(检出量为15个卵囊和49 个孢囊)，热解离(检出量为8个卵囊和25个孢囊)的效果并不好，较多卵囊和孢囊仍 附着在磁珠上，而且受热后磁珠的聚集性能变差。 265 第四届环境模拟与污染控制学术研讨会论文集 表1膜溶解法与洗脱法的两虫检出量比较 图3IMS热解离方式的镜检结果 图4IMS酸解离方式的镜检结果 3．鉴定环节的简化方法 在本研究中观察到的同样能发出绿色荧光的非两虫类似物质主要可以分为两种：絮 状假阳性物和囊泡状假阳性物。由图5可以看出，无论是从大小还是形状，通过观察是 可以将它们和两虫直接区分开的，无需进行后续的DAPI，DIC确认步骤。 图5两虫密度检测过程中观察到的假阳性物质与两虫的对比 4．污水再生处理系统两虫密度检测流程的设计 根据上述试验结果，污水再生处理系统的两虫密度检测流程初步设计为：采集水样 数。通过定量标样投加试验发现，无论是纯水还是二沉池出水的检测结果都明显高于 1623方法的接受标准。对于较纯净的水样，浓缩环节是回收率的主要限制因素；对于