相思子毒素抗原、抗体制备及两种免疫学检测方法建立.pdfVIP

摘 要 毒性作用，也是一种对公共安全存在潜在威胁的牛物恐怖剂，因此，发展和建立特异、灵 敏的检测相思了毒素方法是十分急需、重要的。 本文经对相思．了毒素的传统提取纯化方法的优化、改进，建立了相思了毒素新的提纯 制备技术，获取的天然毒素作为建立相应检测方法的参考物质。利用大肠杆菌表达的重组 相思了毒素A链蛋白制备了2种动物来源的多克隆抗体，建立了基于胶体金免疫层析、 双抗体夹心牛物素．亲和素ELISA的相思予毒素快速、特异和灵敏的检测鉴定方法。 首先，根据相思予毒素对半乳糖的特异性结合能力，采用亲和层析技术将相思了种了 中大部分杂质除去；由于在植物种了中蛋白毒素总是与凝集素并存，根据二者分．了量的差 异进行了凝胶过滤层析，去除凝集素，最终获得天然相思予毒素纯品，电泳纯度为98％。 然后，利用大肠杆菌表达重组相思了毒素A链蛋白，经金属螫合层析法纯化后，将 重组相思了毒素A链蛋白抗原免疫大耳白兔、昆明小鼠，分别采集、纯化兔血清多抗和 鼠腹水多抗。接着利用兔抗重组相思了毒素A链和鼠抗重组相思了毒素A链多克隆抗体， 结合标记技术，分别建立基于双抗体夹心法的胶体金免疫层析检测卡和基于牛物素．亲和 600ng／mL、0．06ng／mL；线性范围分别为：30ng／mL600 收率分别80％-110％，66．7％--133％；变异系数均小于10％。 最后，采用动物血清及几种常见食品模拟环境样品，蓖麻毒素及其他常见毒素评价显 示两法特异性良好，模拟环境试验的样品检测敏感性相同。 关键词：相思子毒素；重组相思子毒素A链；多克隆抗体；胶体金免疫层析；生物素．亲和素 ELISA定量检测 ABSTRACT kindof toxin．Itexhibits issimilarto one effect， Abrin，which ricin，iS plant strongcytotoxic whichexisted threatto andwouLdbeusedasbioterrorism security． agent potential public methodtodetectabtin is and toestablishand new Therefore，itimportantnecessary develop with and highspecificitysensitivity． abrinwas methodforextractionand of Inthis traditional purification improved paperthe abrin thisnew and methodwasestablished．Theobtained optimized．Newpurification using usedasreferenceinrelevant antibodiesfromanimal methodwas polyclonal