第33 、34讲----15届高三生物一轮复习-选修1.pptVIP

15届高三生物第二轮复习 第33、34讲 传统发酵技术的应用 及微生物的培养与分离 选修一 专题1(P1--12) 专题2(P14--30 ) 《学习指导与精讲》P218--229 考纲： 1. 微生物的分离和培养 2. 培养基对微生物的选择作用 3. 利用微生物进行发酵来生产特定的产物 4. 运用发酵加工食品的基本方法 考点1.微生物的实验室培养 1.培养基的基本知识 培养基的种类及区别 按物理性质分类 固体培养基 可通过培养基的营养构成中是否添加凝固剂（琼脂）及添加量的多少判断其物理状态 半固体培养基 液体培养基 按功能分类 选择培养基 通过控制特定的营养或培养条件，使目的菌可生长，而其他菌不能生长 鉴别培养基 通过添加特殊物质使目的菌菌落呈现特殊颜色或反映，而非目的菌菌落无相应现象 培养基的营养构成 一般成分 水、无机盐、碳源、氮源 特殊成分 维生素、氨基酸、碱基等特殊物质（生长因子） 其他条件 PH、氧气、温度等 固体培养基的制备 制备过程 计算→称量→溶化→灭菌→倒平板 注意事项 倒平板时，拔出棉塞后，要使锥形瓶的瓶口迅速通过酒精灯火焰；平板冷凝后要倒置；制作是否合格，可将不接种的培养基在适宜条件下培养作为对照。 2.无菌技术 （1）消毒与灭菌 消毒 概念 用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物 方法及适用对象 煮沸消毒法 \ 巴氏消毒法 不耐高温的液体，如牛奶。 化学药剂消毒 酒精（玻璃器皿、手、无菌操作台等）、氯气（消毒水源），84消毒水等 灭菌 概念 用强烈的理化因素杀死物体内外所有微生物菌体及其芽孢和孢子 方法及适用对象 灼烧灭菌 接种工具（接种环、接种针等）或其他金属用具 干热灭菌 干热灭菌箱，160~170°C，1~2h，耐高温且需保持干燥的物品，如玻璃器皿 高压蒸汽灭菌 100kPa、121°C、15~30min。最常用的灭菌方法。 （2）无菌技术的具体应用 倒平板、接种时需在酒精灯的火焰附近进行； 超净工作台使用前用酒精擦拭； 无菌室使用前用紫外灯照射半小时； 接种环每次挑取菌种前需灼烧； 涂布器使用前浸在酒精中； 外植体接种前要消毒等 3.微生物的接种方法 平板划线法 概念 通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。 注意事项 挑取菌种前及第二次和以后划线前均需灼烧接种环，冷却后进行划线；第二次划线及以后均从上次划线末端开始，目的是将聚集的菌种逐渐分散开；划线结束后将平板倒置培养。 稀释涂布平板法 系列稀释操作 经稀释涂布平板法接种的培养基，菌落相对均匀分布，而平板划线法接种的培养基不同区域菌落数量有较大差异；若要对菌种进行计数，则须采用稀释涂布平板法接种。 涂布平板操作 4.特定微生物的筛选与鉴定 尿素分解菌的分离 实验设计 土壤取样→样品稀释及涂布平板（培养基以尿素为唯一氮源）→培养、观察（控制适宜的温度、培养时间，选择菌落数目稳定时的记录作为结果） 菌种鉴定 在以尿素唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，如果是尿素分解菌生长，它可将尿素分解产氨，培养基PH升高，酚红指示剂变红。 纤维素分解菌的分离 实验设计 土壤取样→ 选择培养→ 梯度稀释→ 将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上→ 挑选产生透明圈的菌落 菌种鉴定 刚果红染色法 方法一：先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应 方法二：在倒平板时就加入刚果红 1. 纤维素和纤维素酶 纤维素酶是一种复合酶，它包括C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，具有催化分解纤维素的作用，其作用 过程如下： 纤维素 纤维二糖 葡萄糖 C1酶 CX酶 葡萄糖苷酶 例：分解纤维素的微生物的分离 2.纤维素分解菌的筛选原理 刚果红 纤维素 红色消失，出现透明圈即：可根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。 3.土壤中纤维素分解菌的筛选流程 土壤取样→选择培养→梯度稀释→将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上→挑选产生透明圈的菌落。 →红色复合物 ①纤维素分解菌的选择培养基为液体培养基，因培养基中无凝固剂，利用液体培养基以增加纤维素分解菌的浓度。 ②选择培养基以纤维素做碳源和能源，其它绝大多数微生物不能正常生长；鉴别培养基因含琼脂，故为固体培养基，刚果红染色法就是应用的此培养基。 ③为确定得到的菌是否是纤维素分解菌，还需进行发酵产纤维素酶的实验。纤维素酶的发酵方法有液体发酵和固体发酵两种。纤维素酶的测定方法，一般是对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的葡萄糖进行定量测定。 ④流程中的“选择培养”是否需要，