电针对EAE大鼠急性期血清IL-10、TNF-α含量的影响.pdfVIP

cell proliferation. J Neurosci, 2008,25:2687-2701 电针对EAE 大鼠急性期血清 IL-10 、TNF-α含量的影响 辛随成 刘燕青 易锦 李倩 吴旭丽 （北京中医药大学针灸推拿学院 北京 100029 ） [摘 要] 目的：探讨电针对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE ）急性期的治疗 效果及其作用机制。方法：采用豚鼠髓鞘碱性蛋白(MBP)与完全福氏佐剂混合免 疫 Wistar 大鼠制备 EAE 模型，观察各组急性期发病情况及血清 TNF-α、IL-10 含量的变化。结果：电针及激素组均能明显改善急性期 EAE 的症状，显著提高 血清中 IL-10 的含量，降低TNF-α的含量，且两者之间没有差异。结论：电针治 疗通过提高血清中 IL-10 含量，降低 TNF-α含量，干预调节 Th1/ Th2 细胞的分 化，为电针治疗多发性硬化的作用机理提供实验依据。 [关键词] 电针；多发性硬化；实验性自身免疫性脑脊髓炎；IL-10 ；TNF-α 多发性硬化（MS ）是以中枢神经系统白质脱髓鞘病变为特点的自身免疫性 疾病，目前尚无肯定有效的防治措施。传统治疗以免疫干预为主的疗法，如：皮 质激素、免疫抑制剂、β干扰素等，不但费用昂贵，而且很难控制病情。近年电 针治疗 MS 临床疗效满意，但对于其作用机理的研究尚少。本实验是在建立 EAE 模型的基础上，探讨电针对 EAE 的治疗作用及其可能的机制，为临床应用提供 理论依据。 1 材料与方法 1.1 材料 实验动物：Wistar 大鼠，6～8 周龄，体重 180～200g ，雌性，购于北京维通 利华实验动物技术有限公司；豚鼠，体重 400±g ，雌雄不限，购于北京海淀兴隆 实验动物养殖场。主要试剂及药物器材：卡介苗（60mg/支），由北京生物制品研 究所提供；不完全福氏佐剂（10mg/支），由北京百事创新科技有限公司提供；注 射用甲泼尼龙琥珀酸钠（40mg/支），由Pfizer Manufacturing Belgium NV 生产； 生理盐水（500ml/瓶），由四川科化药业股份公司生产；无菌针灸针（100 支/盒）， 由苏州医疗用品厂有限公司出品等。 1.2 EAE 模型的制备 392 将豚鼠麻醉后用生理盐水进行心脏灌注，在冰上取豚鼠脊髓，去脊膜称重， 与冰生理盐水制成 50% （重量/体积）的脊髓生理盐水匀浆，将其与完全福氏佐 剂（CFA，每１ml 含 6mg 卡介苗）混合，以无菌注射器在冰上抽打，直至成为 油包水乳剂。取上述抗原乳剂 0.5ml，分别注入Wistar 大鼠的四足掌胶质垫及背 [1] 部皮下（0.1ml/部位），制成EAE 动物模型 。 1.3 分组及治疗方案 空白对照组大鼠（10 只）：于大鼠的四足掌胶质垫及背部皮下（0.1ml/部位） 注射生理盐水，其后正常饲养。免疫诱导后的大鼠（36 只）按随机数字表随机 分为三组（每组 12 只）：EAE 模型组，电针治疗组和激素治疗组。模型组：造 模后正常饲养。电针治疗组[4] ：造模后第 10 天开始用 25mm 毫针刺入大鼠百会 穴（顶骨正中）、双侧肾俞穴（第 2 腰椎旁）、双侧后三里穴（膝关节后外侧， 腓骨小头下约 5mm ），深度约 5～7mm，用变频电针仪，升频 1～100Hz，强度 为 1～3mA，每次 15 分钟，隔天治疗 1 次。每次施术时都应为同一人操作，且 技术熟练，取穴准确，进针深度适中。电极连接方式：一侧肾俞穴与同侧后三里 相连，百会穴未加电刺激。激素治疗组：造模第 10 天对大鼠进行激素冲击疗法， 按照每次尾静脉注射 30mg/kg 药量给予甲泼尼龙琥珀酸钠，每天一次，共 3 次。 各组均于免疫后第 18 天（急性期）取材，留取血清及腰膨大处脊髓组织并保存。 1.4 发病情况的评估 [2] 实验动物的纳入标准通常根据 Knono 等 提出的标准，使用双盲法评价大鼠 出现的症状，进行神经功能评分。0 分，无明显异常；1 分，动物尾部张力降低 或