家蚕黄血近等基因系SSH文库的构建及其部分ESTs研究.pdfVIP

华东地区第十一次蚕种学术研讨会论文集 家蚕黄血近等基因系SSH文库的构建及部分ESTs的研究 (摘要) 陈兆羽1徐安英2‘李木旺2赵云坡3周博3孙平江2钱荷英2张月华2 (1江苏科技大学，江苏镇江212018；2中国农业科学院蚕业研究所，江苏镇江212018； ‘3中国科学院上海植物生理生态研究所，上海200032) 由于天然彩色茧的优良特性，蚕业学者对天然有色茧的着色机理进行了多年的研究。从 形态遗传学角度已经证明家蚕茧色受遗传基因控制【l】，与中部丝腺的色素透过性有关。参与 茧色遗传的基因较为复杂，以黄茧为例，有控制桑叶类胡萝卜索透过中肠壁的黄血基因(Y)、 酬，Y)控制类胡萝卜素从中肠内腔到上皮细胞的吸收使家蚕血淋巴呈黄色，是形成黄色茧 系的基础。 家蚕黄茧着色是因为类胡萝卜素的存在，在这些色素的吸收和转运过程中有多种蛋白 P南tein，CBP)的报道。但是，类胡萝卜素在任何一种动物系统中的吸收和转运机制至今仍不 是很清楚。日本学者天竺桂弘子囝通过RNAi抑制家蚕体内类胡萝卜素结合蛋白 (carotenoid—binding Tabunoki 赖Y基因的蛋白[31，其表达的降低会导致黄茧着色的下降回o H等问从家蚕丝腺 cDNA文库中克隆了编码CBP的基因。TsuehidaK等围证实血淋巴和茧没有颜色的分子依据 是与细胞吸收胡萝卜素相关的Y基因的隐性突变。去年，Takashi 因第二外显子的缺失是Y基因隐性品系形成的原因，并通过转基因进一步证实了CBP作为 控制类胡萝卜素递呈着色的关键因素，直接依赖并对应于Y基因，但是转基因后家蚕的茧色 强度依然很弱，其中的分子机制有待进一步研究。对家蚕黄血近等基因系及其轮回亲本进行 基因差异表达研究，有可能找到除CBP基因之外黄血性状形成的其它辅助因子。 subtraetive 抑制差减杂交(suppression 生高度富集的差异表达基因，从而获得低丰度稀有基因的方法。与DDRT—PCR和RDA相 比．具有速度快、效率高、敏感度高、假阳性率低等优点。抑制消减杂交技术(SSH)以其高效便 一192- 华东地区第十一次蚕种学术研讨会论文集 捷和低假阳性的优越性受到广大研究人员的重视，色在分子生物学的各个领域得到了广泛 的应用。本研究应用SSH技术通过构建关于家蚕黄血近等系消减杂交文库来进行差显分 析，对与家蚕黄血性状的相关基因进行了探索性研究。， 本研究以家蚕黄血品系KY和白血品系HB构建家蚕黄血近等基因系。用回交18代的 家蚕黄血基因(Y)近等基因系回交群体中的黄血个体和白血个体的中肠作为实验材料，依照 CLON7砸CH公司PCR—Select7IMcDNASubtractionKit方法构建了家蚕黄血近等基因系消减 杂交cDNA文库。通过对文库随机挑选的部分阳性克隆进行测序，用CAP3软件聚类拼接， 涉及能量代谢、RNA分子水平相关调节因子、酶类、结构蛋白等，由此初步揭示了可能参与Y 基因协同作用的相关蛋白表达的种类和数量，为进一步深入开展对蚕茧着色的分子机理研 究及将来通过遗传选择培育天然有色茧品种提供了信息基础。 一193—