实验三酶Km值测定.ppt

* 概念 研究各种因素对酶促反应速度的影响，并加以定量的阐述。 影响因素包括有 酶浓度、底物浓度、pH、温度、 抑制剂、激活剂等。 ※ 研究一种因素的影响时，其余各因素均恒定。 * 酶活性可以用在一定条件下所催化的化学反应速度来表示。 测定酶活力，实际上是测定酶促反应的速度。反应速度一般以在一定条件下单位时间底物的消耗量或产物的生成量来表示。 酶活性的表示 * 底物浓度对反应速度影响 在其他因素不变的情况下，底物浓度对反应速度的影响呈矩形双曲线关系。 [S] V * [S]： 底物浓度 V： 不同[S]时的反应初速度 Vmax：最大反应速度(maximum velocity) Ｋm：米氏常数(Michaelis constant) Ｖ Vmax[S] Km + [S] ＝ ── Michaelis Menten 方程式 * Km值 ① Km等于酶促反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度（单位是mol/L）。 ② 生物学意义： a) Km是酶的特征性常数之一； b) Km可近似表示酶对底物的亲和力； 同一酶对于不同底物有不同的Km值。 Km最小者为酶的天然底物或最适底物。 * Km的测定 Km＝ [S] 2 ＝ Km + [S] Vmax Vmax[S] Vmax V [S] Km Vmax/2 Km的单位为底物浓度单位 [S] – V（A) 作图 A * Vmax[S] Km+[S] V = （林－贝氏方程） 两边同取倒数 Ｋm值与Ｖmax值的测定 1/[S] - 1/V (1/A）作图 (1/A） 1/[S] * 碱性磷酸酶AKP活性测定 * * 注意事项 1.底物和酶取样准确 2.保温时间准确 1 2 3 4 5 6 7 加入酶的时间 加入碱性溶液 终止反应的 时间 9:00:00 9:01:00 9:03:00 9:04:00 9:05:00 9:06:00 9:02:00 9:15:00 9:16:00 9:17:00 9:18:00 9:19:00 9:20:00 9:21:00 保证每个试管的反应时间为15分钟 * 原始数据记录 1 2 3 4 5 6 7 8 A1 0.000 * 实验报告注意事项 1.原理 2.数据记录表格 3.绘制矩形双曲线图 4.绘制双倒数图，并通过双倒数图读出碱性磷酸酶AKP对磷酸苯二钠的Km值 1 2 3 4 5 6 7 A [S] 1/A 1/[S]