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抗人纤维蛋白噬菌体单链抗体库的构建和鉴定
抗人纤维蛋白噬菌体单链抗体库的构建和鉴定
王 沂 1张春明1王 洋2郝建秀1宋娜玲1刘金剑1.贺欣 1刘鉴峰1闫玉军1,王德芝1
摘要：目的 应用噬菌体展示技术构建抗人纤维蛋白单链抗体(scFv)文库，筛选高亲和力抗人纤维蛋白scFv并进行鉴
定。方法 利用人纤维蛋白免疫小鼠,分别扩增小鼠VH和VL基因，经重叠延伸聚合酶链反应(PCR)将VH和VL基因拼接
成scFv基因,SfiⅠ/NotⅠ双酶切克隆人pCANTAB5E噬菌粒载体，转化E.coliTG1构建成库,采用人纤维蛋白原对抗体库进
行负筛选，人纤维蛋白进行正筛选，酶联免疫吸附分析 （ELISA）检测阳性克隆的抗原特异性并进行测序分析。结果 构建了
库容为8.7× 106的抗人纤维蛋白 scFv库,ELISA测定显示scFv具有较高的抗原特异性；抗人纤维蛋白scFv基因序列长
732bp,编码244个氨基酸,VH和VL基因均有明确的3个互补决定区和4个骨架区。结论 成功构建了抗人纤维蛋白
scFv文库,并筛选到高亲和力的抗人纤维蛋白scFv,为新型血栓显像剂的开发奠定了实验基础。
纤维蛋白；噬菌体抗体库；单链抗体；人
R392.11 A 1009-7090(2012)03-0287-05
WANG YiZHANG
ConstructionandcharacterizationofsinglechainFvphagedisplaylibraryagainsthumanfibrin
Chun-mingWANGYangHAOJian-xiuSONGNa-lingLIUJin-jianHEXin,LIUJian-feng,YANYu-jun,WANGDe
zhi
1.中国医学科学院,北京协和医学院放射医学研究所,
天津市分子核医学重点实验室,天津3001922.河北联合大学生命
科学学院,河北唐山 063000
2012-02-07 2012-03-23
作者简介：王沂 （1979-），女，天津市人，硕士研究生,主要从事基因
工程抗体研究 电话：022E-mail：wangyi718@
天津市 自然科学基金项目 （一般项目）(10JCYBJC09900)
通讯作者：王德芝 （1964-）,女，天津市人，本科,副研究员,主要从
事基因工程抗体研究工作。E-mail:wangdezhi2008@。
-288-
-289-
-290-
nosisandtherapy[J].ExpertOpinBiolTher,2001,1(5):845-
855.
@@[5]SHENBei-fen,CHENZhi-nan,LIUMin-pei.Recombinantan
tibodies[M].Bejing:SciencePress,2005:98-111.[沈倍奋，陈
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