单链抗体的制备及其应用.pdfVIP

2009年第13期 中国饲料 一33一 单链抗饰的制备及其应／＼J．二二用 7’”” 9…… …一9 责麓善会然裳莩怒墨……… 人兽共患病研究教育部重点实验室 河北科技大学生物科学与工程学院 韩雪 河北省饲料工业协会 李菲 【摘要】单链抗体由于分子质量小、穿透力强、半衰期短、特异性好和免疫原性低等特点，越来越引起学者的重视。 本文就单链抗体的制备、表达及应用等方面作一综述。 【关键词】单链抗体；制备 [中图分类号】$811．2 【文献标识码】A hadthecharactedsticsoflowmolecular han [Abstract】Single--chainantibody weight，powerfulpene乜ability，short life andlow and ofthe anti· period，finespecificityimmunogenicity．Thepreparation，expressionapplicationsingle-chain Welt．ereviewed． body 【Keywords】single-chainantibody；preparation 单链抗体是具有亲代抗体全部抗原结合特异 可变区和轻链可变区通过Linker互补序列。互为 性的最小功能结构单位，具有分子质量小(仅为完 引物及模板合成完整的|sc而基因．再以两端的引 整抗体的1／6)、组织穿透力强、血流中半衰期短、 物进行PCR扩增得到大量的＆而基因产物。这 免疫原性低和可在原核细胞系统表达等特点。在 种方法简单易行．且不必因设计内切酶位点而引 疾病临床诊断、治疗、预防和蛋白质提纯等方面具 入不必要的氨基酸残基。 有重要作用和广阔的应用前景。 1．3连接方式重链可变区的N端与轻链可变 1单链抗体的制备 区的C端相连，或重链可变区的C端与轻链可变 1．1 基因来源从杂交瘤细胞、致敏B淋巴细胞 区的N端相连。其表达产物都可以折叠成具有抗 和非致敏B淋巴细胞中抽提总RNA．用提纯的原结合能力的单链抗体。目前最常用的Linker是 mRNA或细胞总RNA逆转录成cDNA，再以此为由4个甘氨酸和1个丝氨酸重复3次排列组合 模板扩增出重链可变区(VH)和轻链可变区(VL) 基因。在扩增可变区基因时，引物的设计可根据基 重链可变区和轻链可变区自由折叠。从而维持重 因框架结构的碱基组成和顺序分别合成扩增重链 链可变区和轻链可变区间的构象(Adair等。 可变区和轻链可变区基因的PCR引物。在基因设 1994)。 计中应尽可能保持亲本抗体可变区序列的完整性 2单链抗体的表达 和真实性(谭文庆，2001)。 单链抗体的表达是通过所构建的表达载体转 1．2 重链可变区和轻链可变区的拼接方法 目 化宿主细胞来实现的。目前单链抗体大多在大肠 前。常用的将重链可变区和轻链可变区拼接的方 杆菌(E．coli)中表达。大肠杆菌生长速度快。易于 法主要是两种：一种是将接头(Linker)设计在表操作。转化和转导效率高，可在短时间内大规模地 达载体上．两端各有限制内切酶酶切位点供重链 生产抗体蛋白，便于纯化、分析和应用。然而，大肠 可变区和轻链可变区的插入。另一种是重叠延伸 杆菌不能对重组抗体进行翻译后的糖基化修饰。 拼接法(Ve