八种野生动物蛔虫分子鉴定与两种蛔虫抗原基因表达及免疫保护研究.pdf

八种野生动物蛔虫的分子鉴定及两种蛔虫抗原罐因的表达与免疫保护研究 摘要 野生动物是宝贵的自然资源，保护野生动物是全人类的共同责任。大熊猫、黑猩 猩和白眉长臂猿均属世界濒危物种，小熊猫、北极熊、棕熊、马熊和四JII黑熊为我国 的二级保护动物。蛔虫是这些动物体内最常见、危害最严重的寄生虫，野生和圈养种 群均可感染与发病，因此搞好大熊猫等珍稀野生动物蛔虫病的防治是保护野生动物的 一项重要技术措施。 对动物蛔虫进行准确的分类鉴定是开展蛔虫生物学及防治等研究的基础性工作。 蛔虫是一类宿主特异性较强的寄生虫。目前，对寄生于大熊猫和小熊猫等野生动物体 内蛔虫的种类与分类地位尚存在一定的争议。过去对动物蛔虫的分类鉴定主要依赖于 形态与生物学方法。由于宿主与地理环境等因素所导致的遗传变异，传统的形态与生 物学分类研究方法在一些蛔虫近缘种的分类鉴定中的局限性日益明显。采用传统的形 态学分类方法对蛔虫进行分类，很难准确地反映蛔虫种群的真正情况。长期以来，大 熊猫等野生动物蛔虫病的防治均以药物驱虫为主，但驱虫药物均不同程度地存在副作 用且长期使用可能产生抗药性等问题，因此也需要研究新的防治技术。 为了更好地防治野生动物蛔虫病，本研究运用寄生虫分子分类常用靶基因 (ITS．2、NDl基因)对大熊猫、小熊猫等8种野生动物蛔虫的进行了研究，从而为以形 态学为基础的传统分类提供DNA分子水平的依据。同时，本研究也分别采用RT．PCR 原核表达载体进行诱导表达，并对表达的重组蛋白进行Western．blot分析和免疫保护 研究，从而为研制西氏贝蛔虫和似蚓蛔虫基因工程疫苗的提供候选抗原。主要研究工 作和结果如下： 1．大熊猫等八种野生动物蛔虫的ITS-2和NDl基因序列分析及系统发生关系研究 为了探讨野生哺乳动物蛔虫的分类地位。本研究测定了寄生在大熊猫、小熊猫、 北极熊、棕熊、马熊、黑熊、黑猩猩和白眉长臂猿体内蛔虫的核糖体第二内部转录间 隔区(ITS．2)和线粒体NDI基因碱基序列，分析了其碱基组成和序列间的同源性，结 果表明：大熊猫、小熊猫和4种熊科动物蛔虫的ITS．2基因和NDl基因部分序列同 源性分别为80．4％～99。7％和90。4％～98．6％；黑猩猩和白眉长臂猿体内蛔虫的 八种野生动物蛔虫的分子咎定及两种蛔虫抗原皋闪的表达jj免疫蹀护研究 后免疫小鼠，3次免疫后用似蚓蛔虫感染性虫卵攻击小鼠，7天后处死小鼠，取其肝脏 和肺脏分离似蚓蛔虫幼虫，结果发现rAl一Agl—FCA组幼虫回收率比对照组幼虫减少了 用于制备似蚓蛔虫基因工程疫苗。 5．似蚓蛔虫A1．A醇基因的克隆表达和重组表达蛋白的免疫保护研究 抗原基因，该基因与猪蛔虫L2R37基因(△旦Q墨21Z里)的序列同源性为96．0％。构建 分析其重组蛋白能被兔抗似蚓蛔虫阳性血清所识别。似蚓蛔虫A1．A92基因表达的重 组蛋白纯化后与弗氏完全佐剂(FCA)混合液接种免疫小鼠，3免后用似蚓蛔虫感染性 虫卵攻击小鼠，7天后处死小鼠．取其肝脏和肺脏分离似蚓蛔虫的幼虫，结果发现 体显著升高愀O．01)。本研究结果为似蚓蛔虫病的早期诊断及似蚓蛔虫基因工程苗疫 苗的研制奠定了基础。 关键词：蛔虫；分子鉴定：克隆表达；免疫保护研究 八种野生动物蛔虫的分子鉴定及两种蛔虫抗原摹蚓的表达与免疫保护研究 Abstraet animalsare Wild valuablenatural ofwildanimalsisthe resollrces，the protection common ofall mankind．Giant and ale responsibility pandas，chimpanzeesgibbons theworld arctos endangeredspecies，Ailurus maritimus