氨磷汀对大剂量甲氨蝶呤致消化道黏膜损伤防治作用实验及研究.pdf

摘要 氨磷汀对大剂量甲氨蝶呤致消化道黏膜损伤防治 作用的实验研究 研究生 田丽 导师 陈长英教授主任护师 郑州大学第一附属医院 郑州450052 摘 要 目的 肠黏膜损伤动物模型，初步探讨氨磷汀(amifostine)对甲氨蝶呤致小鼠小肠黏 膜损伤的保护机制，为临床应用氨磷汀防治化疗导致的小肠黏膜损伤提供理论 依据和研究基础。 方法 1本研究采用腹腔注射法构建HDMTX诱导的小肠黏膜损伤的动物模型。 290只实验小鼠随机分为5组，即A组正常对照组(n=18)腹腔注射0．9％ (260mg／kg)；C组甲酰四氢叶酸钙(calcium 给药后24小时肌肉注射给药(2．6mg／kg)，每6小时1次，共3次，CF给药量为 (n=1 给药量为HDMTX给药量3％。 3大体观察与组织形态学研究：每天观察各组小鼠的精神状态、活动情况、 摘要 体重变化、大便性状，5组小鼠分别于d3、d5取小肠空肠近端组织标本，HE染 色制备小肠组织切片，于光学显微镜下观察各实验组不同时间点空肠近端组织 形态学变化。 4生存期：每日观察各组小鼠的死亡情况，并统计小鼠生存期。 blood cell，WBC)水平。 6逆转录聚合酶链反应技术(reverse chainreaction， transcription．polymerase RT-PCR)：分别于d3、d5取小肠空肠近端组织标本，利用聚合酶链反应，测定 d3、d5各组小肠组织中bcl．2和bax的表达水平。 结果 1 HDMTX腹腔注射后d2，除正常对照组，其余各组均出现不同程度的体重 下降，HDMTX单药组体重下降尤为明显，氨磷汀联合CF组症状较其它组轻， 差异有统计学意义(P0．05)。 2观察各实验组小鼠空肠组织形态学变化，各实验组空肠绒毛长度、隐窝深 度于d3、d5，差异有统计学意义(P0．05)。 3各实验组腹泻发生率差异有统计学意义(尸O．05)。d2～d5空白对照组、 HDMTX组、CF组、氨磷汀组、氨磷汀联合CF给药组总腹泻发生率分别为O％、 100％、77．78％、66．67％、50％，除正常对照组外，氨磷汀与CF联合给药组腹 泻发生率最低。 4各实验组小鼠死亡率差异有统计学意义(P0．05)，空白对照组、HDMTX 组、CF组、氨磷汀组、氨磷汀与CF联合给药组总死亡率分别为O％、66．67％、 44．44％、50％、16．67％，氨磷汀联合CF组的死亡率明显低于其它各组。 6采用半定量PCR得出，与正常对照组小鼠肠黏膜组织bcl．2表达、bax表达 相比，HDMTX对照组、CF组、氨磷汀组、氨磷汀联合CF组小鼠肠黏膜组织 存在不同程度的bcl．2表达下降，bax表达上升情况；与HDMTX对照组相比， CF组、氨磷汀组、氨磷汀联合CF组小鼠肠黏膜组织bcl．2表达上升、bax表达 下降，氨磷汀联合CF组小鼠肠黏膜组织优于CF组、氨磷汀组。 II 摘要 结论 1成功构建HDMTX诱导的小肠黏膜损伤动物模型，用药后d2即出现明显的 体重下降，d3、d5较严重，光镜下观察有典型的小肠黏膜炎病理改变：小肠绒 毛变短、变粗，隐窝变浅，肠上皮细胞脱落，广泛的炎细胞浸润。 2CF、氨磷汀、氨磷汀联合CF给药对HDMTX诱导的小肠黏膜损伤均有一 定的防护作用，预防性应用氨磷汀给药，能够减少体重的下降程度、腹泻的发 生率及病死率，对骨髓抑制有一定的保护作用。 3氨磷汀联合CF给药的防治效果明显优于氨磷汀、CF组，氨磷汀通过上调 bcl．2的表达，下调bax的表达，抑制了肠上皮细胞的凋亡，减轻了小肠黏膜炎 的损伤程度，为临床使用细胞保护剂氨磷汀预防化疗诱导的黏膜炎的发生提供 了理论依据。 关键词：甲氨蝶呤氨磷