水稻光温敏核雄性不育遗传的基因定位.pdf

摘要 高等植物雄性不育现象在自然界普遍存在，其中细胞质雄性不育 Male and (Cytoplasmic Thermo．sensitiveGenicMale Sterile，PTGMS)最具利用价值。 20世纪70年代，继李必湖率先发现野败型CMS后，我国水稻育种工作者 成功地培育出“三系”杂交水稻，并在生产上大面积应用，为我国乃至全世界 的粮食生产的持续发展发挥了重大作用。同时，石明松1973年首次发现水稻光 敏核雄性不育自然突变体，为杂种优势利用开辟了另一条新途径。由于PTGMS 系的花粉育性会随日长和温度变化而转变，它在长日高温条件下，不仅可作为 不育系用于杂交制种，并且在短曰低温条件下能自交繁殖种子；从而使种子生 产过程得以简化，可咀免去用于产生不育系种子的保持系，即将“三系”减为 “两系”。目前两系法，也己在水稻生产上广泛应用。 PTGMS的遗传研究业已表明，农垦58S和农垦58之间杂交后代的育性分 离比例呈典型的单基因遗传，而由其衍生的多种不育系，则通常受两对基因控 制，且其等位性较为复杂。有关光温敏核不育基因定位研究也已有较多报道， 然而，尚未涉及大面积应用的温敏不育系培矮64S。因此，很有必要对其光温敏 核不育基因作进一步遗传分析、基因精细定位以及遗传效应评估。本研究首先 对用于基因定位的SSR(SimpleSequence Repeats)标记分析体系进行优化，试 图改进目前实验过程中样品DNA提取工作量大、实验成本高以及现有SSR标记 数量不足等问题；然后，以协青早A、培矮64S等为对照，通过花粉育性镜检 观察和种子育性的调查，重点对嘉浙A雄性不育系育性不稳定性问题作了比较 分析；最后，利用两优培九的F2构建极端隐性雄性不育群体，对光温敏不育基 因进行了精细定位，并试图确定其候选基因，为分子标记辅助选择和基因克隆 作准备。本研究获得的主要结果如下： 1．建立了一套水稻SSR标记应用技术体系，内容包括：(1)大群体DNA样品 高效提取：(2)籼粳亚种间SSR标记信息的比较分析及多态性预测；(3)PAGE Gel (Poly—Acrylarnid 可以提高效率，降低成本，节约时间。因此，对分子育种有一定的参考价值。 比，嘉浙A群体会出现较高正常(可育)花粉率(O～30．00％)，正常花粉主 要集中在第5和第3枝梗。通过花粉育性与温度相关性分析发现，嘉浙A花 粉育性恢复与抽穗前9d～1ld田间温度有关，平均温度为25．2±1．4C时，可 育花粉百分率将达到最高值，当平均温度升至29．8±2．1℃时将表现稳定不 育。与CMS系相比，培矮64S在7月上旬至8月下旬长日高温条件下，不 同穗位间花粉育性无差异，表现为稳定不育，且典败花粉率占90％以上。培 矮64S的正常可育花粉百分率与抽穗前12d～】6d的温度变化达最大负相关， 自然长日条件下育性转换临界温度为平均24．8±1．7℃：可育花粉率峰值出现 下旬至8月上旬。 育性状受2对隐性重叠基因控制。从R代获得320株极端不育单株构建成定 andrecessive．class approach)，进行光温敏雄性不育基因定位。在第7染色体 上合成了72对引物，试验表明有32对多态性引物与pmsl连锁。其中pmsl 与第7染色体短臂上的SSR标记RM6776共分离，且与两侧的连锁标记 RM21242和YFll之间的遗传距离均为0．2cM。查询月本晴基因组序列信息， 发现RM21242和YFl1之间的物理距离为101，lkb，TIGR基因组注释表明， 该区间共有14个预测基因；其中的LOC O_含个一码编点位 DNA 结合结构域的MYB类蛋白，通过GO(Gene Ontology)分析，发现该基因产 物与热刺激的敏感反应相关，推测LOC Os