小鹅瘟病毒VP3基因的克隆表达及抗小鹅瘟病毒单克隆抗体的研制.pdf

鹿钟文：小鹅瘟病毒VP3基冈的克隆表达及抗小鹅瘟病毒单氟隆抗体的研制 小鹅瘟病毒VP3基因的克隆表达及抗小鹅瘟 病毒单克隆抗体的研制 研究生：鹿钟文 导师：秦爱建教授 摘要 Parvovirus 鹅细小病毒感染(Goose Infection)，又称为小鹅瘟(Gosling plaque)，是由 鹅细小病毒(Goose 要侵害30日龄以内雏鹅和雏番鸭，以渗出性肠炎、心、肝、肾等实质器官炎症为特征， 致病性强，死亡率高，是目前危害养鹅业的主要疾病之一。本研究对GPV疫苗株SYG61 和流行株P．1的VP3基因进行了克隆测序及序列比较分析，进而对两者的部分生物学特性 进行了比较研究，并应用杆状病毒表达系统对GPV疫苗株SYG61的VP3基因进行了表达： 利用GPV 防治提供了优良的生物学材料。 1．小鹅瘟病毒VP3基因的克隆与表达 基酸。序列对比结果显示，两株不同GPV毒株的VP3基因核苷酸同源性为95．8％，氨基 的测定结果为GPV 死量(LD50)为10。233／0．2mL；GPV 45／0．2mL。表明两株GPV毒株毒力、致病力没有明显 对雏鹅的半数致死量(LD50)为10。3 差异。利用雏鹅制备的抗GPVSYG61株和P．1株的免疫血清，通过鹅胚中和试验测定了两 鹿钟文：小鹅瘟病毒VP3基冈的克隆表达及抗小鹅瘟病毒单克隆抗体的研制 II 血清交叉反应，且抗原性交叉较大，属于同一血清型。 经重组到杆状病毒基因组中；用抗GPV多抗血清进行间接免疫荧光检测，结果出现亮绿 色荧光，证明VP3基因获到了良好表达。 2．抗GPV单克隆抗体的制备与鉴定 本研究利用GPV 细胞进行融合，通过间接免疫荧光检测杂交瘤细胞上清，筛选获得了2株抗GPV的单克 的小鹅瘟抗原产生明显的沉淀线。并且均能与杆状病毒表达系统表达的GPVVP3蛋白反 应，产生特异性的亮绿色荧光。本研究所获得的两株单抗为小鹅瘟抗原诊断方法的建立奠 定了基础。 关键词：鹅细小病毒；VP3基因；生物学特性；重组杆状病毒；单克隆抗体 鹿钟文：小鹅瘟病毒VP3基冈的克隆表达及抗小鹅瘟病毒单克隆抗体的研制 of VirusVP3 and Expression GoslingPlague gene ofMonoclonalAntibodies Development GPV against M．S Lu Candidate：Zhongwen Supervisor：Prof．AijianQin Abstract Goose infectionknownas iscaused parvovirus goslingplague by goose Itisan and infectiousdiseasesthatis tolessthan30 acute，highlycontagiousseptic