联合应用基因工程和组织工程技术诱导裸鼠脊柱异位成骨的实验的研究.pdf

联合应川基IN1．程与组织工程技术诱导裸鼠脊柱异位成骨的实验研究 联合应用基因工程与组织工程技术诱导裸鼠脊柱异位成 骨的实验研究 摘 要 目的：利用基因重组技术将人骨形态发生蛋白2(1lBMP2)基因转染 入裸鼠体内以观察诱导异位成骨的能力，从基因工程与组织工程联合应用 角度作一些创新性的尝试，为临床骨修复及脊柱融合治疗提供新的思路和 方法。 方法：1．梯度离心法分离培养hMSCs，体外贴壁培养扩增，在倒置显 微镜下观察其形态、生长增殖情况以及诱导成骨能力等各种特性，并通过 的成熟肽基因片段，将其与原核表达载体PBV220酶切后相连接并测序， 构建PBV220一hBMP2的原核基因表达系统，在DH5a大肠杆菌下扩增并 Xba 达载体系统，并利用脂质体介导转染hMSCs，通过对转染细胞的RT-PCR、 料}认复合培养4d，光镜和扫描电镜下观察分析细胞在支架上的形态及 生长增殖，并将其复合培养植入到裸鼠的脊柱两侧的背脊肌内，4周后取 材，制作脱钙切片，观察其诱导新骨形成情况。 结果：1．梯度离心法能分离培养出较为纯化的hMSCs，细胞大都呈梭 联合虚用基H工程与组织工程技术诱导裸鼠脊撞异位成骨的实验研究