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工蜂酸性磷酸酶的分离纯化及性质研究 生物化学与分子生物学专业 研究生江琰 指导老师刘克武 对其性质进行了较全面的研究。首先比较ACPase在工蜂、雄蜂虫蛹、蜂 蜜、蜂王浆等材料中的活力大小。再将工蜂ACPase的初提物经分段盐析、 G．200凝胶过滤等纯化步骤， DEAE．SepharoseF．F离子交换层析、Scphadex 得到经聚丙烯酰胺凝胶电泳为单一蛋白区带的酶制剂。提纯倍数77．24， 酶液比活力为16．22U／mg蛋白(对硝基苯磷酸二钠作底物)。用动力学方 法测得该酶最适pH为4．1，最适温度52。C。以对硝基苯磷酸二钠为底物测 圆二色谱(cD)分析显示，酶分子中c‘．螺旋占13．84％；p．折叠占25．68％； 氨基酸，富含天门冬氨酸残基。 度时具弱抑制作用。cd”比Pb”对该酶活性影响更小。蛋白变性剂脲能使 酶失活。利用双倒数作图法研究Cu2+、C，、Fe”对酶的作用，结果表明 这些离子对酶的抑制作用为非竞争性抑制类型，用Dixon作图法求出其抑 究这些物质对酶的紫外光谱的影响，结果表明：随Zn2+浓度增加，酶的紫 外吸收峰位置不变，强度增加；随M92+、K+浓度增加，吸收峰位置不变， 强度减小：随cd2+浓度增加，吸收峰强度增加，最大吸收波长红移；随Pb2+ 浓度增加，酶的紫外吸收峰逐渐消失；Cu”、Fe”、Cr”对酶的紫外吸收光 谱影响较大，低浓度条件，其紫外吸收光谱特性消失，特征吸收峰也消失。 脲使酶的紫外吸收峰强度增大。 研究化学修饰剂二巯基苏糖醇(DTT)、对氯汞苯甲酸(pCMB)、N． 不同浓度，不同时间条件下对酶活力的影响以及荧光光谱变化。结果表明： 半胱氨酸残基的巯基和二硫键被修饰后，酶活力下降且荧光强度减小：色 氨酸残基被修饰后酶活力减小，荧光强度降低：含羟基的氨基酸残基被修 饰后酶活力降低，荧光强度增加；组氨酸残基被修饰后酶活力基本不变， 酶的荧光强度也不改变。 关键词 意蜂工蜂： 酸性磷酸酶： 分离纯化： 性质 中国图书分类号 Q556 andCharacterizationofAcid Isolation，Purification fromAPIS PhosphataseCERANA Molecular and MajorBiochemistry Biology Gratuate AdvisorL／uKewu 1缸ngYa栉 AbstractAcid isolatedand from ofthe hadbeenstudied．The purifiedApiscerana，andpropertiesenzyme ACPaseactivitiesofthefreshbee and cerana pupa、honey、royaljellyApis were theAcid was obtainedfrom compared，thenphosphatasepartially Apis cerana sulfate with by homogenate，ammunium and filtrationwith G·200．The DEAE—sep