glu10在八游仆虫中心蛋白构象及生物功能发挥中的作用.pdfVIP

摘要 中文摘要 kDa，属于钙调蛋白超族，含有四个保守的EF- 中心蛋白(cenain)分子量约为20 核、膜间空间等部位，在中心粒的复制和中心基体纤维的收缩中发挥重要作用。突 变氨基酸的研究方法被广泛用来考察蛋白中某些重要氨基酸在蛋白构象及生物功能 发挥中的作用。其中紫外照射突变法的优点是可以得到大量突变型蛋白，为研究工 作提供较多的实验样本。但其突变结果具有不可知性，需要进行系列的筛选工作。 定点突变法以其明确的突变位点以及能够得到高纯度突变蛋白等优点而在许多研究 工作中被采用。 基于对150多种钙调蛋白超族成员序列的分析，E-helix链的规范序列可以表示 的发挥起着重要作用。本文用分子生物学的方法表达、纯化得到了纯度较高的八肋 的GIul01对蛋白构象及生物功能发挥的作用。 首先，采用荧光光谱法、紫外．可见分光光度法考察了Glul01的突变对蛋白基本 光谱的影响。结果表明保守的Glul01的突变对蛋白的激发、发射光谱和吸收光谱均 不产生影响。此外，以n尹为荧光探针考察了突变对蛋白金属结合性质的影响。结 强度，推测是由于突变使蛋白构象发生变化而导致蛋白该结合位点与Tb3+作用时的 荧光敏化增强。说明Glul01对保持蛋白正常的金属结合性质发挥着重要作用。 其次，研究了Glul01的突变对蛋白与稀土离子作用的影响。结果表明稀土离子 与蛋白作用时蛋白构象的变化程度远大于钙离子与蛋白的作用。此外，与EoCffll相 比，Glul01的突变明显增强了E101K与稀土离子作用时的共振光散射强度，说明 Glul01对保持蛋白与稀土离子作用时正常的构象变化起重要作用。 最后，考察了Glul01的突变对蛋白与蜂毒素作用的影响。结果表明蛋白与蜂毒 素作用时形成l：l复合物，且Glul01的突变对蛋白与蜂毒素的作用影响较小。 关键词：中一tl,蛋白：定点突变；荧光光谱；稀土离子；蜂毒素 I 摘要 Centrinisa of tothe conserved protein20／cDa,whichbelongshighly EF-handCaM of hasfour superfamilyCa2+-bindingproteins．Cen(rin Ca2+-binding eachsiteCallbindwithoneCa2+．砧e sites(EF．hand)and localizationofeentriniSnotlimitedtoeen仃osomesbutiSrelatedtoothercell likethenucleus orthe a compartments perimembranespace．Centriusplay fundamentalroleincentdole andcontractionofcenterbasal duplication body methods are fibrous．Theofthemutationofaminoacids usedinthe widely oftheeffectofcertain acids study amino totheconformationandthe functionof