h5n1亚禽流病毒荧光抗体的制备及初步应用.pdfVIP

摘 要 禽流感(Avian 征，人类亦能被感染，且死亡率较高。近年来禽类H5N1亚型流感在全球范围内 的不断爆发引起了世界的高度关注，所以建立特异、准确、敏感检测禽流感的方 法，成为迫在眉睫的问题，也成为目前研究的热点。本研究利用单克隆抗体技术 制备禽流感病毒(AⅣ)血凝素蛋白单克隆抗体，纯化后用异硫氰酸根荧光素 (F11℃)进行标记，制备荧光抗体，结合直接免疫荧光实验(dFAT)建立检测 H5N1亚型AⅣ的检测方法，并将其与其他AIV毒力检测方法进行比较，同时 通过免疫组化的方法运用荧光抗体检测了AIV在感染动物体内的分布情况。 将禽流感病毒HAB，ol株纯化后免疫8周龄雌性BALB／c小鼠，取其脾细胞 与SP2／o骨髓瘤细胞进行融合，采用间接ELIsA筛选阳性细胞孔，再经有限稀 释法克隆培养，筛选稳定分泌单抗的细胞株。本研究共获得3株稳定分泌抗禽流 感病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为186、2A3和3A5。其中186 1：28：且与新城疫病毒及其他亚型的禽流感病毒不发生交叉反应；Western．blot 分析表明，3A5株单抗为抗禽流感病毒血凝素蛋白单抗。采用G蛋白亲和柱层 析对腹水进行纯化，将纯化的禽流感病毒血凝素蛋白单抗用FITC标记制备荧光 抗体，并对该荧光抗体进行质量鉴定，试验结果表明，所制备的荧光抗体具有特 异性和较强的敏感性，可初步应用于AIV的实验室检测。 姜键词：禽流威病毒：堕责降抗体：荧光抗体：初步应用 Avianinfluenzaisa of causedinfluenzavirusA．Avian groupsymptomsby hasraised foritsenconomic to influenza great．conccHIS importancepoultryindustry nature arise and threattothe health．Recently,the ofHSNl potential public widespread attention．Soa and isinconcerned． highly accurate，rapidhypersensitivetechnique virus Monoclonal avianinfluenza was against hemagglutinationdeveloped antibody of meanstheconventional Was protoc01．The by IgG purifiedbyaffinity with titerand ininfected and FITC．Virus distribution chromato笋aphyconjugated mOUseWasdetecteddirectfluorescent by antibodytest(dFAT)． 8-week-oldfcmale mice immunizedwith AIV The Baib／c were the HAB／01， which concentrated．Thecellsofimmunizedmice fused