hplcms在然来源生物活性成分快速筛选中的应用研究.pdf

摘要 本论文的研究旨在发展、建立一系列可应用天然来源生物活性成分快速筛选 与分析的新方法。主要内容包括：拓扑异构酶作为靶分子的HPLc血vIS一亲和超 滤筛选；抗体作为靶分子的HPLc／MS一亲和超滤筛选：血管紧张素I转换酶作 为靶分子的HPLc／MS一高通量生物活性筛选。 1)拓扑异构酶作为靶分子的HPLC煳s一亲和超滤筛选方法研究： 以DNA拓扑异构酶作为靶蛋白，将其与多种化合物的混合物共同孵育，对 酶有亲和性的小分子物质能与酶发生作用形成复合物，通过超滤将该复合物与其 它无亲和性的小分子物质分离；加酸使酶变性后，原与酶形成复合物的小分子化 合物被游离，通过再次超滤而获得。应用HPLC皿订S对这些小分子活性物质直接 进行定性定量分析。在该方法中，选用拓扑异构酶I和拓扑异构酶11分别作为靶 分子，通过生物亲和超滤筛选，从混合物中捕获抗癌活性成分。一系列拓扑异构 酶I抑制剂，包括喜树碱、g一硝基喜树碱和10一羟基喜树碱等和两种拓扑异构 酶II抑制剂阿霉素和柔红霉素作为被筛选化合物库模型，研究结果验证了该方法 的可行性。在此基础上将该筛选方法应用于植物愈伤组织培养细胞中抗癌成分的 筛选，获得了目标分子。 2)抗体作为靶分子的HPLc府订S一免疫亲和超滤筛选方法研究： 采用抗体作为靶蛋白捕获可与之发生亲和性结合的生物活性化合物。这些化 合物可被抗体从多种混合物中选出，用超滤的手段使这些能与抗体结合的化合物 与其它混合物分离，应用高效液相色谱结合电喷雾质谱或大气压电离源质谱直接 分析鉴定小分子的活性化合物。通常能识别某种半抗原的抗体，可识别与该半抗 原相似的小分子物质。磺胺二甲基嘧啶半抗原，齐墩果酸半抗原和柔红霉素半抗 原首先被合成，通过免疫动物，从兔血清中制备得相应的抗体。以磺胺二甲基嘧 啶抗体作为靶分子，建立了相应的筛选模型，活性化合物被超滤后应用液质联用 方法进行分析鉴定。在本研究中，应用齐墩果酸抗体和柔红霉素抗体作为靶分子 对白花蛇舌草、芦荟、山茱萸和奇蒿等几种天然植物提取物中的活性物质进行了 筛选，并成功地筛选出生物活性成分芦荟大黄素、齐墩果酸、熊果酸及齐墩果酸 甙。 3)血管紧张素I转换酶作为靶分子的HPLc／Ms一高通量筛选方法研究： 在该方法中，待筛选物质首先通过高效液相色谱结合质谱被分离和鉴定，它 们对血管紧张素I转换酶的抑制活性强弱利用微孔板读板器快速测定。该方法集 活性筛选、化学分析于一体，提供了一个高通量筛选血管紧张素I转换酶抑制剂 的方法。 该研究中的血管紧张素I转换酶从猪肺中被分离并纯化，用于血管紧张素 I转换酶抑制剂的筛选。卡托普利加入到柚皮提取物中作为被筛选库，建立高通 量血管紧张素抑制剂的筛选模型，并将此模型应用到葛根、珠子草、黄芩提取物 中血管紧张素I转换酶抑制剂的筛选，并从中筛选出葛根素，甲氧基葛根素和 corilagin等具有抑制血管紧张素I转换酶活性的成分，其中葛根素和 corilagin具有较强的抑制活性。此外，鱼发酵生产的鱼酱油也被用作待筛选物 质，在其复杂组分中有两种目标分子显示出较强的ACE抑制活性。 ABSTRACT Thisthesis the andestablishmentofsires development ofnew reports screening methodsforbioactive HPLC／MScombine compoundsby withother biology includethree ultrafiltrationofDNA techniques，which methods：affinity for candidate topoisomerases-targetedcompounds