对REGγ在癌信号通路中作用及其若干修饰和的研究.pdfVIP

摘要 蛋白酶体降解途径是受到精密调控的特异性蛋白降解途径，在许多细胞通路 中执行关键作用，但需要蛋白酶体激活因子来激活。蛋白酶体激活因子RE研能 显著地增强蛋白酶体的催化活性。研究发现，RE研能以泛素非依赖方式特异地 降解其靶蛋白．p21及SRC．3，突破了曾经认为REGt／20S蛋白酶体复合物仅水解 小分子多肽的认识1。另研究提示，l迮研具有促进细胞增殖及抗凋亡的作用， 并与肿瘤发生有密切关系。因此对RE研的在细胞内作用机制的研究具有重要的 意义。 运用生物信息学的方法对大量的公共实验数据库进行整合和分析，我们推测 出l也研与在人类癌症信号通路中起作用的关键基因的相互关系，并运用分子生 物学的实验方法加以验证。这是一种比较新颖的基因筛选方法，这也将为癌症的 预防与治疗提供新的视角与研究方向。 本文主要从以下四个部分入手，研究RE@在癌症信号通路中作用及其若干 修饰的机制： 1．RE研磷酸化对其功能的影响 在MET细胞(小鼠原代胚胎成纤维细胞)中转染RE研野生型和磷酸化位点 内源p21的降解与相互作用。结果证明：与正常嘞相比，突变体 l砸研$248／252A降解p21的速度大大的降低。 2．RE研SUMO化对其功能的影响 在293T细胞中转染RE研野生型或者SUMO化位点突变型和P21质粒，用 免疫共沉淀的方法检测它们的相互作用。结果证明：与RE研相比，RE研-6KR (SUMO化缺陷型)与p2l结合能力显著减弱。 3．RE研和p21结合位点的研究 用。结果证明：在这些位点中，F159A是影响p2l与REC_n结合的主要位点。 4．REGr在癌症信号通路中作用的研究 方法检测由生物信息学方法推测出的RECn与在癌症信号通路中作用的关键基因 的相关性。结果证明：RECn与癌症信号通路中基因相关性的大部分 RealTime-PCR实验结果与生物信息学的预测趋势是一致的。 综上所述，本文主要围绕REq的若干修饰对其与p21相互作用的影响和 RE研与癌症信号通路中关键基因的相关性展开了一系列的研究，并得出了相应 的结论，为REGr功能及调控的深化研究奠定了基础。 关键词：RE研，p21，磷酸化，SUMO化，癌症基因 ABSTRACT Proteasome is a mechanismof degradation pathwayregulatedbyprecise acriticalrolein cellular specificproteins．Itplays many pathways，which degrading needtobeactivedthe activator．ProteasorneActivator by proteasorm RE研call the ofthe is enhance demonslratedthat significantlycatalyticactivityproteasome．It its andSRC一3inan and RE研candegradetargetproteins-p21 ubiquitin broke the of manner,which ATP-independentproteolytie throughpreviouscomept that canfacilitatethe ofsrmll m狮nosproteasomeonly