抗蚜虫PPA基高效表达载体构建及其在小麦原生质体中的表达验证.pdf

摘 要 摘 要 虫害是威胁农业生产的一个世界性问题，利用转基因技术创造新的抗虫植物品 系对农业害虫防治、环境保护及农业可持续发展具有重要意义。目自玎国内对．于植物 nivalis 凝集素抗虫基因转化研究大多集中于雪花莲凝集素(Galanthus Agglutinin， GNA)基因。天南星科半夏属的掌叶半夏为我国特有的中草药，掌叶半夏块茎的粗 提液对蚜虫有强致死作用，粗提液的主要成分是植物凝集素蛋白(Pinellia pedatisecta 桃蚜活性。 在单子叶植物中应用较广的为玉米泛素启动子Ubi，它有着启动效率高、甲基化 程度低、遗传性状稳定等优点，Ubi启动子在转基因小麦中有较高活性，表达效率可 (彳eg“D厂明McfD，．妇)的一种发光蛋白，它作为报告分子有许多优点：稳定、灵敏度 高、荧光反应不需要任何底物及辅助因子，使表达检测非常简单，同时它在细胞中 自主表达、没有种属特异性、对受体细胞无毒性、对目的基因没有影响。 启动子、GFP为报告基因)，从而构建出一个抗蚜虫的高效植物表达载体，为小麦 的遗传转化奠定材料基础，为植物特别是农作物害虫防治提供了新的基因资源。 本文运用基因工程技术对掌叶半夏凝集素PPA基因进行改造，并将其转入真核 表达载体，得到以下成果：1、成功构建植物高效表达载体pUGP，该载体包含玉米 泛素启动子Ubi、掌叶半夏凝集素PPA基因和绿色荧光蛋白GFP基因，为后续的蛋 白表达实验和功能实验提供实验平台和基础材料。2、成功制备小麦原生质体，并对 其进行了表达验证。 关键词真核表达载体；植物凝集素；PPA基因；泛素：原生质体：瞬时表达 河北科技人学硕十学付论文 Abstract The isaworldwide to pest problemthreatingagricultural production．It’ssignificant ’ tocreatenew insect-resistantstrainswith for plant transgenictechnologyag“culturepest andsustajnable control，enVjronmental Of protection deVelopment the 1ectjn jnsect-resjstanlaI．e fbcused planl genesmost】y on￡heGalanthusnivalis isoneendemicofChineseherbalmedjcine．the Agglutinin(GNA)gene．Pinella specie ．c11Jdeextract6．om PineUia hasa lethaleffecton the pedatisecta main