烟草ABC转运白家族鉴定及次生代谢物质转运的功能研究.pdf

Identification and Functional Characterization of Nicotiana Tabacum ABC Transporters Involved in the Transport of Secondary Metabolites A Thesis Submitted to Chongqing University in Partial Fulfillment of the Requirement for the Doctor’s Degree of Science By Xiaodong Xie Supervised by Prof. Qingyou Xia Specialty：Botany School of Life sciences of Chongqing University, Chongqing, China April, 2014 中文摘要 摘 要 烟草是重要的经济作物和科研模式植物。烟草在生长过程中产生非常丰富的 次生代谢产物，如生物碱、酚类和萜类等化合物，这类物质的产生是烟草在长期 进化中对生态环境适应的结果，它们在烟草抵御昆虫的侵袭、增强抗逆、抗病等 方面起着重要作用。同时，烟草的次生代谢物质已被广泛应用在医药、食品和农 药等领域。作物一种特殊而又重要的经济作物，从某种程度上说，烟草的使用价 值和经济价值与它的次生代谢产物密切相关。因此，开展烟草次生代谢工程和代 谢调控的研究有着重要的意义，其中，通过基因工程技术进行次生代谢物质的转 运与积累的研究是调控次生代谢物质的有效途径。烟草次生代谢物质种类繁多， 但其在次生代谢物质的转运与积累方面的研究相对滞后。 ABC （ATP—Binding Cassette ）转运蛋白是广泛存在与自然界生物体中的一类 超家族跨膜蛋白。ABC 转运蛋白在植物次生代谢物质的转运与积累过程中扮演重 要的角色，已经成为近年来植物次生代谢工程重点研究方向之一。为了从分子水 平研究烟草ABC 转运蛋白对次生代谢物质的转运与积累的机制，本研究对烟草基 因组范围内ABC 转运蛋白进行了系统的分析，并针对烟草次生代谢物质转运的功 能研究等方面开展了一系列的工作，主要结果如下： ① 基于栽培烟草品种红花大金元的基因组数据和预测基因，在烟草基因组中 鉴定到265 个ABC 基因，约占烟草基因总数的0.4%，这是目前已知生物体中最大 的ABC 转运蛋白家族。对烟草ABC 转运蛋白进行了家族分类、命名、结构形式 以及亚细胞定位等基本信息的分析，其中，ABCG 亚家族是烟草最大的ABC 亚家 族，占烟草总ABC 基因的56%，是目前植物ABC 亚家族中成员最多，占比例最 大的亚家族；ABCE 亚家族仅含有2 个ABC 蛋白，是烟草最小的ABC 亚家族。 ② 分析比较了烟草ABC 基因与其它物种ABC 基因的系统进化关系。结果表 明烟草ABCA 亚家族基因的进化速度较快，物种间的直系同源关系不明显，烟草 ABCE 亚家族最保守，而ABCC 和ABCG 亚家族基因呈现出明显的物种特异性扩 增现象；另外，从大多数烟草ABC 亚家族中鉴定到了一些其他植物中已知功能的 ABC 同源基因。 ③ 基于烟草 ABC 转运蛋白的数据，筛选并克隆了一个参与烟碱转运的候选 基因－NtWBC13 ，属于ABCG 亚家族，编码一个半分子的ABC 转运蛋白，膜蛋白 亚细胞定位软件分析结果显示，NtWBC13 定位在细胞膜上；半定量 PCR 和 qRT-PCR 分析发现，NtWBC13 基因的转录水平受烟碱、茉莉酸甲酯（methyl j asmonate，MeJA ）和损伤处理的诱导；多序列比对结果表明，NtWB