瓜蒌含药血清及齿琵甲对Hela细胞增殖抑制作用的研究.pdfVIP

摘 要 摘 要 癌症是威胁人类健康的常见病及多发病，然而，临床常用的化学合成药物给患者带 来严重的不良反应和明显的毒副作用，因此，开发天然抗肿瘤药物越来越受到人们重视。 瓜蒌是栝楼或双边栝楼的成熟果实，是抗癌中药复方中常见的药物，为了明确瓜蒌 水煎剂对肿瘤细胞增殖的影响，本实验利用血清药理学方法制备高、中、低 3 种剂量的 瓜蒌含药血清，分别处理 Hela 细胞 24 h 和 48 h ，MTT 法检测该含药血清对 Hela 细 胞生长的抑制作用， Wrights-Giemsa 染色和 AO-EB 染色法观察凋亡细胞的形态学 变化，利用 DNA 琼脂糖凝胶电泳从分子水平检测其对肿瘤细胞的影响。结果表明， 不同剂量的瓜蒌含药血清均对 Hela 细胞的增殖有抑制作用，且呈剂量时间依赖关系， 其中，高剂量组瓜蒌含药血清对 Hela 细胞的抑制率最大，20% 的高剂量瓜蒌含药血 清在 24h 、48h 的抑制率能分别达到 36.4%和 48.2% ，说明瓜蒌具有抑制宫颈癌 Hela 细 胞增殖和诱导细胞凋亡的作用。 弯齿琵甲(Blaps femoralis)是拟步甲科(Tenebrionidae)琵甲族(Blaptini)琵甲属(Blaps Fabricius,1775) 的一个优势昆虫，民间长期用于治疗肺气肿、风湿、肿瘤等疑难杂症。 本研究首先利用血清药理学的方法制备弯齿琵甲含药血清，采用上述方法研究弯齿琵 甲对Hela 细胞增殖的抑制作用。结果显示弯齿琵甲含药血清能够抑制肿瘤细胞增殖， 且呈时效、量效关系，其中，20%琵甲高浓度含药血清在 24h 和 48h 的抑制率分别能达 到 23.4%和 37.3% 。 为了进一步分析弯齿琵甲抗肿瘤作用的有效成分，本研究采用硫酸铵沉淀法得 到弯齿琵甲粗蛋白提取液，进行体外实验。倒置荧光显微镜下观察凋亡细胞形态，DNA 琼脂糖凝胶电泳检测凋亡细胞 DNA 断裂情况，Annexin V-FITC/PI 双染法定量检测凋亡 细胞以及 Western-blot 法检测 Caspase-3 蛋白表达的情况。结果显示弯齿琵甲粗蛋白能 够诱导细胞凋亡， 15mg﹒mL-1 的弯齿琵甲粗蛋白在48h 以及72h 的凋亡率能分别达到 10.95%和 28.075% ，坏死率也分别达到 2.02%和 18.34%，Western-blot 检测其诱导细胞 凋亡的通路包括 caspase 依赖的方式。 综合以上，中药瓜蒌及弯齿琵甲对 Hela 细胞的增殖具有一定的抑制效果，同时也 显示出我国中药在抗肿瘤研究中的巨大潜力，此项研究为以上两种中药的临床实验提供 I 摘 要 了可靠的依据。 关键词 瓜蒌含药血清 弯齿琵甲含药血清 弯齿琵甲粗蛋白 Hela 细胞 凋亡 II Abstract Abstract Cancer is one of commonly and frequently encountered diseases threatening the human health seriously. However,the use of adjuvant chemotherapy drugs on clinical had been brought to patients more and more side reactions. So, people pay increasing attention to the natural medicines as it has less toxicity, low side reactions than the synthesis drugs.