白僵菌对小菜蛾棉铃虫的毒力比较及侵染机制差异性研究.pdfVIP

摘 要 摘 要 球孢白僵菌(Beauveria bassiana (Balsamo) Vuillemin) 是目前国内外应用最广泛的昆 虫病原真菌之一，能侵染 15 个目 149 个科的 700 多种昆虫，不同白僵菌菌株对不同昆 虫的致病力存在很大差异。本研究以在不同寄主中分离纯化得到的白僵菌菌株HFW-05、 TE-07、Lu-08、Dj-04 为供试菌株，明确了四株供试菌株的种间分类和酯酶型、生物学 特征；测定了四菌株对鳞翅目害虫小菜蛾、棉铃虫的毒力；通过扫描电镜观察了不同菌 株分生孢子在同种昆虫和相同菌株分生孢子在不同昆虫的表皮侵染；在此基础上，明确 了三种酶对菌株在表皮侵染过程中的作用，并克隆了四株白僵菌的几丁质酶基因。 通过对四株球孢白僵菌 ITS 区序列和酯酶同工酶图谱分析，结果表明四株白僵菌为 球孢白僵菌种下的不同酯酶型。测定四菌株对小菜蛾和棉铃虫2 龄幼虫的毒力，结果表 明，HFW-05 菌株对小菜蛾致病力较高，6 d 后校正死亡率为 87.14%，其余三株均不高 于 40% ，四菌株对棉铃虫 6 d 后校正死亡率均低于 15%。 扫描电镜观察显示：分生孢子在小菜蛾、棉铃虫体表的附着部位相似，多附着在凹 陷部位、刚毛窝处、褶皱处、体壁嵴状突起之间，体壁的光滑部位分布较少。四菌株分 生孢子在小菜蛾表皮附着 12h 后均可萌发，高致病力 HFW-05 菌株孢子萌发后直接穿透 寄主表皮或产生较短穿透芽管，萌芽管贴于表皮生长，有些萌芽管末端弯曲指向表皮， 在附着后 16 h，萌芽管发生定向生长、垂直向里穿透表皮；其余三株低毒力菌株分生孢 子的萌发、萌芽管的生长行为相似，只是萌芽管在穿透表皮之前伸的较长。供试菌株孢 子在棉铃虫表皮均能萌发，但萌芽管呈蔓延生长无法穿透寄主表皮，感染 36 h 后的试虫 表皮可观察到芽生孢子。结果表明菌株毒力大小与分生孢子在寄主体表的附着能力无直 接相关性，但与萌芽管能否穿透表皮以及穿透时的伸长长度密切相关。 用脂肪酶、蛋白酶K 、几丁质酶三种单一酶液和脂肪酶+蛋白酶、脂肪酶+几丁质酶、 蛋白酶+几丁质酶、脂肪酶+蛋白酶+几丁质酶四种复合酶液分别处理2龄小菜蛾、棉铃虫 后，测定低毒力菌株对目标昆虫的毒力变化。结果显示，菌株对酶液处理后的试虫毒力 均有一定程度的提高，其中对几丁质酶和含几丁质酶的复合酶液处理后的小菜蛾和棉铃 虫毒力提高最明显。对小菜蛾6 d相对死亡率在单一酶液处理之间差异呈极显著 （F=15.955 ，P0.01 ），其中几丁质酶处理后Lu-08菌株的死亡率是对照组的2.9倍，毒力 I 摘 要 提高最明显，脂肪酶处理后Dj-04菌株毒力为对照组的1.15倍；棉铃虫经三种单一酶液处 理后，6 d后相对死亡率在酶处理之间差异性显著（F=17.695 ，P0.05 ），菌株对几丁质 酶处理后的棉铃虫毒力提高最明显，菌株HFW-05、TE-07、Lu-08、Dj-04 的死亡率分别 为对照组的4.52 、5.55、37.33、17.12倍。这在一定程度上反映出供试菌株分生孢子在穿 透小菜蛾和棉铃虫体壁过程中，几丁质酶与供试菌株毒力相关性更显著。 克隆四菌株几丁质酶基因并测序，几丁质酶基因的序列完全相同，编码区包括 1047 bp ，编码了 348 个氨基酸，分子量约为 36.795 kD ，进行同源性分析结果表明，与球孢 白僵菌菌株 NCIM12 16 （EU828354 ）和来源于小菜蛾虫生真菌球孢白僵菌几丁质酶基 因（AY145440 ）的核苷酸同源性最高，同源性达到 98% 。氨基酸序列与球孢白僵菌菌 株 Bb0062 几丁质酶（AAN41259 ）同源性达到99% 。这可能与白僵菌中几丁质酶基因 的多样性以及蛋白在侵染过程中的协调作用相关。 关键词 球孢白僵菌 毒力比较 侵染机制 几丁质酶 II Abstract Abstract