不同中药组方乌作用的体外实验研究.pdfVIP

硕士研究生：张建 指导老师：顾为望 摘要 伴随着社会的不断进步、生活水平不断提高的同时，人们生活节奏的加快、 工作和生活压力的增加、饮食不规律等种种原因引起毛发的异常，过早出现的 白发、脱发等毛发性疾病给工作和生活带来了严重的影响。现代医学认为：白 发是因毛球中黑素细胞形成黑色素的功能减退、酪氨酸酶的活性减低或丧失、 毛干中缺乏黑色素而引起。中医认为白发、脱发的形成与肝肾不足、血气虚弱 有关，中医多从养血活血补肝益肾上进行治疗。 毛发之所以会呈现不同的颜色，是由于毛发内黑素含量和黑素颗粒所致， 其数量越多、密度越大，头发则越呈黑色，反之头发颜色则浅淡。毛发黑素由 毛囊黑素细胞合成，其合成代谢可分为黑素生成、转移和融化三个阶段，任何 一个环节出现障碍均会影响黑素代谢，从而导致毛发颜色变化。 酪氨酸酶为黑素合成的关键酶，皮肤和毛囊的黑素细胞内酪氨酸酶系统的 功能减退、丧失会引起皮肤色素的减少或丧失，从而导致相应的疾病，如毛发 枯黄、无色泽、易折断等。 典籍记载：黑芝麻、蒸首乌、当归养血益精；柏叶、旱莲草凉血乌须而黑 发；柏子仁养心安神，善治血虚、心悸、失眠。而现代医学证明，当归可促进 黑素细胞增殖、黑素生成及激活酪氨酸酶活性。制首乌提取物对黑素细胞体外 增殖及迁移均有明显的促进作用。黄芩提取物可促进小鼠黑素瘤B16细胞增殖、 激活酪氨酸酶活性、提高黑素含量。黑芝麻、薄荷、何首乌、黄芩、菟丝子、 独活等具有激活酪氨酸酶的作用；可以使皮肤出现不同程度的色素沉着：表皮 基底层及部分棘细胞中下层色素增加和多巴阳性细胞增多。 摘要 具有产生黑素功能的鼠B16黑素瘤细胞株，在国内外已被广泛用于研究化 合物或药物对黑素的产生及酪氨酸酶活性的影响。 本实验经理论研究和文献筛选，选取出现频率较高具有乌发作用的中药依 照中医理论进行合理配伍、组方。采用多巴氧化法观察不同中药组方水、乙醇 提取物对酪氨酸酶活性的影响；将其提取物施加于培养黑素瘤B16细胞，研究 其是否具促黑色瘤细胞增殖及促黑素生成的作用，进而揭示各中药组方是否具 乌发作用并为后续的组织培养和动物实验提供参考依据。 目的观察6种中药组方的水、醇提取物对酪氨酸酶活力和对小鼠B16黑素瘤细 胞增殖及黑素生成的影响。 方法 1．以左旋多巴为底物，采用蘑菇酪氨酸酶多巴速率氧化法体外测定酪氨酸酶活 性，在490nm处测定吸光度。 2．以MTT法测定各中药组方提取物不同浓度组的B16黑素瘤细胞增殖活性。 3．NctOH裂解法测定各中药组方提取物不同浓度组B16黑素瘤细胞的黑素生成 量。 结果 l 6种中药组方水提物均具有酪氨酸酶的激活作用，并且随着浓度的增加，酪氨 酸酶活性逐渐增强，呈现剂量依赖关系。6种中药组方醇提物除了组方1外， 其它组方均具有酪氨酸酶的激活作用，且随着浓度增加，酪氨酸酶活性逐渐 增强，呈现剂量依赖关系。其中，水提物巾酪氨酸酶激活率最高的是组方2， 达32．43％(1 mg／m1)；醇提物巾酪氨酸酶激活率最高的是组方5，达13．20％ (1 mg／m1)。除了组方5外，其它组方水提物对酪氨酸酶作用均较醇提物显著。 2 6种中药组方中，组方l、2、3、5水提物和组方2、4、5、6醇提物具促细胞增 殖作用(尸0．05)；水提物中细胞增殖率最高的为组方2，在0．625mg／ml浓 度水平时增殖率为22．60％醇提物中细胞增殖率最高的为组方4，在0．078 1．60％。组方浓度高(10 mg／ml浓度水平时增殖率为l mg／m1)时可抑制细胞生 n 硕士学位论文 长，可观察到细胞形态的异常，甚至可观察到死亡的细胞，即高浓度具有细 胞毒性的作用，其中毒性较强的是组方5水提物。 3组方水提物和醇提物均具有促进黑色素合成的作用(尸0．05)。水提物巾黑 素增率最高的为组方l，在0．313mg／ml浓度水平时增率为75．38％；醇提物中黑 素合成增率最高的为组方l，在1．25mg／ml浓度水平时增率为88．01％。 结