双孢蘑菇SSR记的开发及其在遗传育种分析中的应用.pdfVIP

forMaster Dissertation and ofSSRMarkersin DevelopmentApplication Agaricusbisporus Candidate： Supervisor： Discipline：Botany of andLife CollegeChemistryScience， Normal 321 Zhejiang University,Jinhua004，Zhejiang，China March2014 万方数据 摘要 双孢蘑菇中SSR标记的开发 及其在遗传育种分析中的应用 摘要 应用MISA软件分析了双孢蘑菇基因组SSR位点组成，其中单核苷重复基 序为主导类型，占总SSR的52．9％；其次是三、二核苷酸重复基序，其出现频 的主要重复基序。采用Primer5．0软件设计引物，共设计有效扩增SSR引物112 对，经筛选，其中97对在8份双孢蘑菇基因组中扩增如条带，25对表现出多态 性，进一步研究表明共检测到67个等位基因，平均每个位点2．68个，平均Nei’S 基因多样性指数为0．5023。8份双孢蘑菇品种的遗传相似系数变化范围为0．3363 遗传距离O．46处，8个双孢蘑菇品种(系)分为2个类群，亲缘关系的远近与其 种质来源有一定的相关性。在单孢分离子代的遗传分析中，有19对引物在单孢 分离子代中遵循孟德尔自由分离定律。通过对溶壁酶组成及浓度、渗透压稳定剂、 菌丝培养方法等研究，建立了有效的双孢蘑菇原生质体制备与再生系统。实验利 KC作为渗透压稳定剂，25℃酶解3．4小时，原生 用浓度为1．5％溶壁酶，0．6M 质体量可达106／ml。纯化后的原生质体选择0．6M蔗糖作为渗透压稳定剂， PDMA培养基中25℃培养约10天原生质体可再生。以多态性良好的SSR引物 作为鉴定同核原生质体主要标记，完成了对4株双孢蘑菇同核体的鉴定。论文最 后利用生物信息学的手段挖掘分析了双孢蘑菇和其四孢亚种间的SNP和SV的 差异。 本研究对这些潜在的多态性SSR的开发为双孢蘑菇遗传多样性分析、图谱 构建提供了更丰富的候选分子标记基础，为进一步进行双孢蘑菇新品种的选育和 种质资源的分析评价及管理提供了遗传依据。 关键词：双孢蘑菇：微卫星；单孢分离子代群体；遗传多样性；同核原生质体； SNP：SV 万方数据 摘要 and ofSSRMarkersin DevelopmentApplication Agaricus ’ ’ Dtsporus AB STRACT revealed onthe AMISAsearch simplesequencerepeats(SSRs)basedgenomes