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肺癌内皮细胞蛋白C受体的表达及意义 中文摘要 中文摘要 背景与目的：肺癌是常见恶性肿瘤之一，临床早期常无症状，易漏诊、转移 与复发，预后差。发病率逐年上升趋势，已经成为城市恶性肿瘤的首位死亡原因。 迄今，肺癌发生发展及转移的分子调节机制尚未完全明了，越来越多的证据显示 多数恶性肿瘤患者均表现不同程度的凝血及纤溶异常，引起了医学研究领域的关 C 注。内皮细胞蛋白C受体(endothelial protein 的成员，是相对分子质量为46kDa的I型跨膜糖蛋白，人类EPCR基因定位于 20q11-2，可在多种肿瘤细胞及肿瘤组织表达，研究显示EPCR介导了活化蛋白C (APC)诱导的细胞增殖、迁移和凋亡抑制等功能。本研究拟构建EPCR小发夹 状RNA(smallhairpin 而检测对肺癌细胞系H1299细胞周期、体外增殖、迁移能力以及相关基因表达的 影响，并观察是否能延长荷瘤SCID鼠的生存期。 研究方法：以内皮细胞作阳性对照，通过半定量RT-PCR、蛋白印迹、流式细 胞仪FCM及免疫组化初步检测EPCR在6种肺癌细胞和其它多种肿瘤细胞及肺癌 和癌旁组织的表达情况，并结合临床指标分析其意义。设计和构建能表达针对 vector)和阴性对照载体 EPCRmRNA的3个RNA干扰载体(EPCRpshRNAl，2，3 (controlpshRNAvector)，分别通过脂质体介导转染至H1299细胞。用半定量 RT-PCR、RealtimeRT-PCR、Western blotting和免疫荧光及FCM检测未转染质粒 la 中EPCRmRNA和蛋白表达；经G418筛选(500g／mL)并稳定传代后，选择 受影响的对照H1299／Con及亲代细胞，分别通过细胞周期测定、细胞增殖分析、 划痕“愈合’’模型及相关基因表达等观察肺癌细胞生物活性的改变；分别将三组 鼠的成瘤率、移植瘤的生长速度、移植瘤内微血管密度以及对荷瘤鼠生存期的影 响。 结果：(1)EPCR在所测的6种肺癌细胞及其它多种肿瘤细胞均有表达，在肺 癌组织的表达率显著高于癌旁正常肺组织(PO．01)；EPCR表达与肺癌临床分期有 肺癌内皮细胞蛋白C受体的表达及意义 中文摘要 关，EPCR表达阳性的癌组织中微血管密度MVD显著高于EPCR表达阴性者 和Westem (Po．01)。(3)使用G418(500|lg／mL)筛选并经亚克隆培养获得稳定表达EPCR沉 细胞减少，MTT和划痕实验表明细胞增殖活性和迁移能力下降(Po．01)，同时 瘤的潜伏期和荷瘤SCID鼠的生存期皆明显延长(Po．01)，移植瘤生长速度显著减 缓(PO．05)，移植瘤内MVD显著下降。 结论：(1)肺癌细胞和某些恶性肿瘤细胞均可表达EPCR，肺癌组织表达EPCR 与转移及临床分期相关，提示可能参与了肺癌进展和转移。(2)构建的RNA干 扰质粒能特异而有效的抑制细胞EPCR表达，使H1299细胞周期分布发生改变， 能力降低。(3)阻滞EPCR表达可抑制SCID鼠移植瘤的生长，并延长荷瘤鼠的生 存期，可能与细胞增殖能力下降及抑制肿瘤组织新生血管形成有关。 关键词：内皮细胞蛋白C受体；细胞株；肺癌； RNA干扰；增殖；迁移 作 者：衡伟 指导教师：王兆钺教授 The ofEndothelialProteinC andits in Cancer Abstraet Expression ReceptorSignificanceLung The ofEndo