鲤鱼肌肉脯氨酸肽酶的分离纯化及性质分析.pdfVIP

鲤鱼肌肉脯氨酸内肽酶的分离纯化及性质分析 摘 要 脯氨酸内肽酶(Prolyl 微生物和植物中已有较多发现。PEP是一类能特异性水解多肽链中脯氨酸残基羧基端肽键 的内切酶，在医药领域和工业领域得到了广泛的应用。由于PEP能够有效的降解富含脯氨 酸残基的多肽类物质，推测其与动物肌肉中胶原蛋白的新陈代谢有着密切的关系。但是， 迄今为止，国内外对于鱼类肌肉中PEP的研究报道极少。 Fast Sepharose Phenyl．Sepharose疏水层析、DEAE kDa。 单体结构，分子量为82 酶的最适温度为35。C，其热稳定性较差。热失活动力学实验测定结果显示，自由酶的热 失活速度常数(缸。)明显大于酶与底物结合物的失活速度常数(后’+o)，表明底物对该酶的 oC和40。C时半衰期分别 6．0的条件下，PEP在35 热失活作用具有一定保护作用。在pH min和10rain。 为105 酶活性具有强烈的抑制作用，丝氨酸蛋白酶抑制剂(PMSF和PefablocSC)能够部分抑制 均没有表现出抑制作用。以上结果表明，PEP是一种特异性的丝氨酸蛋白酶。 S一。底物特异性实验结果 和‰，值，结果显示鲤鱼PEP的‰为8．33gmol／L，‰m为1．71 表明，PEP能够特异分解肽链羧基端含有脯氨酸残基的荧光底物以及肽链中含有脯氨酸残 鱼肉胶原蛋白降解的一种重要蛋白酶。 肽指纹质谱分析得到134个氨基酸残基，与海绵(Amphimedon 同源性为100％；与斑马鱼(Danio 的酶为脯氨酸内肽酶。 关键词脯氨酸内肽酶，鲤鱼，纯化，质谱分析，性质分析 Purification and characterizationofaprolyl from theskeletalmuscleof endopeptidase Common carp (Cyprinus carpio) Abstract hasbeenfoundto be Prolylendopeptidase distributedin moMlmals， widely and carl cleavethe micro。organisms bondonthe side plants．PEPspecificallypeptide carboxyl of classhasbeen prolineresidues．Thus，this inthefieldof enzyme extensivelyinvestigated medicineand