鱼鳞ace抑制的研究.pdfVIP

摘要／Abstract 摘要 高血压是引发心血管疾病如心力衰竭、中风、冠心病和心肌梗塞等的重要 inhibitors， 危险因子。血管紧张素转化酶抑制剂(AngiotensinI-convertingenzyme ACEI)是用于防治高血压的最重要的药物之一，但易引起恶心、呕吐、腹泻等 副作用。因此，高效无毒的海洋生物源ACE抑制肽的研制具有巨大的市场空 间。我国存在大量鱼类下脚料，这些鱼类下脚料含有丰富的海洋生物源蛋白 质，可为ACE抑制肽的开发提供重要原料来源。然而，这些鱼类下脚料主要用 来制备低附加值产品，既污染环境，又造成大量资源浪费。本论文以海洋鱼类 下脚料鱼鳞为原料，制备ACE抑制肽，实现海洋生物资源的高值化和产业化， 在满足患者需求的同时避免环境污染，真正实现经济、社会和生态效益。 本文以狗母鱼(Trachinocephalusmyops(Forster))鱼鳞为原料，采用响应 面法优化鱼鳞蛋白多肽的提取工艺和鱼鳞ACE抑制肽的制备工艺；建立食源性 ACE抑制肽体外活性的检测方法；利用多级膜分离技术分离纯化鱼鳞蛋白多 肽；运用多种检测技术研究鱼鳞ACE抑制肽的理化性质。主要研究结果如下： 1．建立高效液相色谱法(HPLC)测定鱼鳞ACE抑制肽的抑制活性。该方 法具有良好的精密度和重复性，在1一200la g·ml’1浓度范围内，马尿酸的浓度 la 与峰面积呈良好的线性关系(R2=O．9999)，最低检测限为0．5g．ml～，对马尿 酸的回收率为99．46～101．19％，相对标准偏差(RSD)为0．55％(n=9)。 2．分析狗母鱼鱼鳞原料的化学成分，确定鱼鳞蛋白质含量为39％，疏水 氨基酸占总氨基酸的33．59％，是制备ACE抑制肽优良的蛋白质源。 3．选择10种特异性蛋白酶提取鱼鳞蛋白多肽，以蛋白质提取率作为主要 的评价指标，水解度为辅助评价指标，筛选出胃蛋白酶为提取鱼鳞蛋白多肽的 特异性蛋白酶。运用响应面法优化鱼鳞蛋白多肽的提取工艺，研究了温度、 pH、时间和酶与底物浓度比对鱼鳞蛋白多肽提取效果的影响，确定酶解的最佳 工艺条件：酶添加量O．90％、温度51℃、pH值1．1、时间5．1h、料液比l：10， 鱼鳞蛋白多肽蛋白质提取率达72．77％。 4．利用陶瓷膜、反渗透膜和电渗析集成的多级膜分离技术分离纯化鱼鳞蛋 白肽，鱼鳞蛋白多肽的得率为78．67％。 摘要／Abstract 5．以纯化后的鱼鳞蛋白多肽为原料，以ACE抑制活性为主要的评价指 标，水解度为辅助评价标准，筛选出中性蛋白酶为制备ACE抑制肽的特异性蛋 白酶。运用响应面法优化鱼鳞ACE抑制肽的制备工艺，研究温度、pH、时间 和酶与底物浓度比对鱼鳞ACE抑制肽ACE活性和水解度的影响，确定制备 ACE抑制肽的最佳工艺条件为温度47℃，底物浓度4％，酶与底物浓度比 O．16mg·ml～。 6．鱼鳞ACE抑制肽的理化性质研究表明样品的蛋白质含量为92．46士 0．05％，水分含量为5．464-0．13％，灰分含量为1．98士0．21％，所含疏水性氨基 酸占总氨基酸含量的36．85％，相对分子质量集中在2000Da左右，ACE抑制活 性ICso值为0．16mg·ml～，比目前市售日本降压肽活性高(0．39mg·ml以)。稳 定性实验表明其具有良好的热稳定性及pH稳定性，对消化酶水解具有一定的 抗性，经消化酶水解后，ACE抑制活性变化不显著，具有制成口服类保健品的 潜力。 关键词：狗母鱼鱼鳞；酶解；ACE抑制肽；膜分离 Ⅱ 摘要／Abstract Abstract is riskfactorofcardiovascular asheart Hypertensionmajor diseases，s